PRACTICA Nº 01

BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO: Definición y normas.

Valorar las normas de bioseguridad en el trabajo de laboratorio.

1.- Seguir las instrucciones y recomendaciones dadas por el docente para cada
sesión practica. No manipule muestras, materiales, instrumentos o equipos por su
cuenta.
2.- Procure ingresar al laboratorio a la hora señalada, con el guardapolvo puesto
y con el material de trabajo previamente solicitado.
3.- Al solicitar microscopios, materiales de vidrio u otros a la unidad técnica debe
revisar que dichos objetos no estén deteriorados, quebrados o incompletos.
4.- Durante su permanencia en el laboratorio aproveche y use adecuadamente el
tiempo, materiales de trabajo, agua, corriente eléctrica, mobiliario, espacio.

5.- Por su bienestar está prohibido fumar, comer o beber en el interior del
laboratorio.

6.- No arroje desechos a los lavaderos ni al piso. Procure colocarlos en bolsas

plásticas par que sean descartadas una vez finalizada las prácticas.

7.- cuando se trabaje con material infeccioso y patógeno (secreciones, exudados,

cultivos bacterianos, muestras virales, muestras sanguíneas, parásitos,
protozoarios) siga atentamente las indicaciones de s profesor de mesa; realice su
limpieza personal con jabón germicida, elimine el material descartable, esterilice el
material de vidrio e incinere las muestras biológicas si es necesario.
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8.- Al calentar un tubo de ensayo, fiola o matraz con sustancias reactivas, cuidar
de no dirigir dichos recipientes hacia uno de sus pares sino hacia un espacio
alejado de ellos.

9.- Sobre la mesa de trabajo de laboratorio debe tener solamente el material

solicitado y libreta de apuntes. Coloque las carteras, mochilas, libros y otros en el
tablero de asistente debajo de la mesa o en las mesas laterales.

10.- El estudiante de una mesa de trabajo por ningún motivo debe dirigirse a otra,
salvo que lo disponga su profesor.

11.- Durante el desarrollo de prácticas observe y grafique con detalle los diversos
experimentos, protocolos o vistas microscópicas; intercambie conceptos, ideas y
punto de vista con sus pares y profesor; y, analice la información teórica sobre la
practica existente en libros, papers, folletos, revistas, etc.

12.- Al término de la práctica, el estudiante debe devolver a la unidad técnica del

laboratorio el material de laboratorio proporcionado; limpiar su mesa de trabajo,
despojarse del guardapolvo; y retirarse ordenadamente.

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 PRACTICA Nº 02
RECONOCIMIENTO ANATOMICO DE CELULAS DEL SISTEMA
INMUNITARIO
I.- INTRODUCCION:

Las respuestas inmunitarias están mediadas por diversos tipos de células y

por las moléculas solubles que secretan. Aunque los linfocitos son esenciales en
todas las respuestas inmunitarias, también intervienen otros tipos de células, ya
sea transmitiendo señales a los linfocitos o respondiendo ante las citocinas
secretadas por los linfocitos T o los Macrófagos. En la fig. Se muestra las células y
moléculas que intervienen en las reacciones inmunitarias.

Las células del sistema inmunitario pertenecen a dos líneas celulares: Línea
linfoide y línea Mieloide.
Línea linfoide: Da lugar a los linfocitos, de los que existen dos poblaciones, los
Linfocitos T y los Linfocitos B, los linfocitos son las principales células
responsables de la respuesta inmunitaria; actúan mediante los receptores que hay
en su superficie.
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Los linfocitos son las únicas células capaces de reconocer específicamente a los
agentes patógenos y, por lo tanto, ellos son los encargados de iniciar las
respuestas inmunitarias adaptativas. Todos los linfocitos proceden de las células
madres de la medula ósea, pero los linfocitos T maduran en el Timo, mientras que
los Linfocitos B maduran en la propia medula ósea (en los mamíferos adultos).
Línea Mieloide: Lleva a la formación de los denominados fagocitos, las células de
la estirpe mieloide participan en mecanismos de tipo inespecífico. Entre sus
elementos se encuentran los macrófagos, células NK (“natural Killer”) y
polimorfonucleares (neutrófilos, eosinófilos y basófilos). Son las primeras células
en participar en la repuesta inmunitaria.
El grupo mas importante de células fagociticas de vida larga pertenece a la
estirpe de los fagocitos mononucleares. Todas estas células proceden de las
células madres de la medula ósea, y su misión es captar, ingerir y destruir
partículas, entre los que se encuentran situados los agentes infecciosos. Para ello
se encuentran situados estratégicamente en lugares en que tienen mayores
posibilidades de capturar dichas partículas. Por ejemplo, las células Kupffer
recubren los sinusoides hepáticos, a través de los que fluye la sangre, mientras
que las células A sinoviales recubren la cavidad sinovial. Las células de esta
estirpe que circulas en la sangre se denominan Monocitos. En un momento dado,
estas células migran hacia los tejidos, pero a diferencia de ellos son las células de
vida corta, que ingieren las sustancias extrañas, las destruyen y, a continuación,
mueren.
Los valores normales de los distintos leucocitos; según la nomenclatura de
SCCHILLING, es la siguiente.
Neutrófilos segmentados 55-65% 3,000 – 5,000 /mm3
Neutrófilos en cayado 03-05% 150 – 400 /mm3
Eosinófilos 00-04% 20 – 350 /mm3
Basófilos 00-01% 1 – 60 /mm3
Monocitos 04-08% 100 – 500 /mm3
Linfocitos 25-35% 1,500 – 4,000 /mm3

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Estas cifras pueden variar por condiciones climáticas, altura, raza, emociones,
emociones, dolor y edad.
Conociendo la relación numérica y la cantidad total de leucocitos por mm3, es fácil
establecer la formula absoluta de cada tipo celular de la siguiente manera:

Formula Absoluta = Recuento global de leucocitos x % Var. Celular / 100

Se contaron 6,000 leucocitos / mm3 y 65% de granulocitos.

Neutrófilos segmentados; entonces:

(6,000 x 65) / 100 = 3,900 Neutrófilos segmentados / de sangre. mm 3

OBJETIVOS:
- Reconocer las células que participan en las repuestas inmunitarias.
-Establecer diferencias morfológicas y tintoriales entre las variedades de linfocitos.
- Aprender los valores porcentuales de las distintas variedades de glóbulos
blancos que se observan en la extension sanguínea.
- Interpretar casos clínicos, cuando se produce variación en el número de cada
variedad de leucocitos.

II.- MATERIALES:
2.1. Material Biológico:
- Sangre total (obtenido por punción venosa, con anticoagulante)
2.2. Material de laboratorio:
- Algodón hidrofílico
- Alcohol yodado y/o medicinal
- Agujas descartables Nº 21G x ½” y /o lancetas
- Frascos estériles con el anticoagulante
- Ligadura de coloración
- Porta láminas
- Láminas portaobjetos
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 - Lámina extendedora
- Colorante Wright
- Agua tamponada pH 6,4
- Microscopios: con objetivos de 40X y 100X
- Aceite de cedro
III.- PROCEDIMIENTO:
Extendido:
- Preparar una lamina, cuyo ancho se ha reducido unos 5mm.; que servirá como
“extendedora”.
- Colocar a un centímetro del extremo de una lámina bien limpia y seca, una gota
de sangre, directamente de la aguja, jeringa o del dedo; por delante de ella colocar
un extremo de lámina extendedora en ángulo de 30º y retroceder hasta que toque
la gota que se extenderá a lo ancho de la primera lamina, luego se desliza la
lamina extendedora siempre en ángulo de 30º, en forma rápida y uniforme, hacia
el otro extremo.
- Si el ángulo entre las láminas es mayor el frotis será más grueso y viceversa.
- Dejara secar las láminas a temperatura ambiente y rotular.

Coloración Wright:
- El frotis bien seco se coloca sobre una gradilla de coloración.
- Cubrir la lamina con un volumen de colorante y dejar por un minuto (4 a 5 gotas)
- Diluir el colorante con dos volúmenes de agua tamponada pH 6.4, mezclar bien,
observándose la formación de una escarcha metálica y dejar por seis minutos.
NOTA: Los tiempos indicados pueden variar de acuerdo a la antigüedad del colorante.
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EJERCICIOS
1. ¿Con qué objetivo se observan los leucocitos cuando se determina una fórmula
leucocitaria?
- Con el de 100x
2. ¿Cómo es el recorrido que se describe en la observación leucocitaria?
- Con la forma de almena
3. ¿Cuándo se han de observar al menos 200 leucocitos?
- Cuando se observa un numero mayor de linfocitos y menos de neutrófilos, o
mas de un 10% de eosinófilos o un 11% de monocitos.
4. Si de 100 leucocitos observados, 20 son linfocitos y el WBC es igual a 7000
leucocitos/mm3 de sangre, ¿cuál es el número de linfocitos que hay en 1mm3 se
sangre?
- N° TL = WBC x % TL/100
N°TL: numero de un tipo de leucocito por mm3 en sangre
WBC: recuento de leucocitos por mm3 de sangre
%TL: porcentaje que representa ese tipo de leucocito con respecto al resto
n°TL = 7000 x 20 / 100
n°TL: 1400 linfocitos por mm3
5. ¿Cómo se llama el aumento de los monocitos?
- Monocitosis

IV. RESULTADOS:
Tipo de leucocito Resultado
Neutrófilo segmentado 39
Neutrófilo en cayado 18
Eosinófilo 2

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Basófilo 1
Monocito 3
Linfocito 37

V. CONCLUSIONES:
Con la técnica de la coloración de Wrigth se pudo identificar la diferencia y la
cantidad de leucocitos según su resultado y un estudio exacto ya que hay muchas
razones por las que los resultados de la formula leucocitaria pueden ser mas altos
o mas bajos de lo normal.
En la sangre estudiada la proporción de leucocitos es normal, porque el numero
de cada tipo de leucocito se encontraba entre valores normales.

PRACTICA Nº 03
RECUENTO Y DIFERENCIACIÓN DE LOS LEUCOCITOS: Fórmula
leucocitaria.
I.- INTRODUCCION:

Es una prueba que mide el porcentaje de cada tipo de glóbulo blanco (GB)
que una persona tiene en la sangre y también revela si hay algunas células
inmaduras o anormales. Nombres alternativos: Diferencial sanguíneo; Fórmula
leucocítica o recuento leucocitario
El médico o personal de salud extrae la sangre de la vena y la recoge en un
recipiente hermético. En los bebés o niños pequeños, la sangre se toma de una
punción en el talón o en el dedo de la mano y se recoge en un pequeño tubo de
vidrio, sobre un portaobjetos o sobre una tira reactiva. Se puede aplicar un
algodón o un vendaje para detener cualquier sangrado.
Un especialista del laboratorio toma una gota de sangre de la muestra y la
extiende sobre un portaobjetos de vidrio. La extensión se tiñe con un tinte especial
(Wright), el cual ayuda a establecer la diferencia entre diversos tipos de glóbulos
blancos. Normalmente, aparecen cinco tipos de glóbulos blancos, también
llamados leucocitos, en la sangre:
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 • Neutrófilos
• Linfocitos (Células B y T)
• Monocitos
• Eosinófilos
• Basófilos
Una computadora o el médico cuenta el número de cada tipo de célula. El examen
muestra si el número de células está en la proporción apropiada entre sí y si hay
más o menos cantidad de un tipo de célula.
Preparación para el examen: No se necesita preparación especial.
Lo que se siente durante el examen: Cuando se inserta la aguja para extraer la
sangre, algunas personas sienten un dolor moderado, mientras que otras sólo
sienten un pinchazo o sensación de picadura. Después, puede haber una
sensación pulsátil.
Razones por las que se realiza el examen: Este examen se hace para
diagnosticar una infección, anemia y leucemia e igualmente se utiliza para ver si el
tratamiento para cualquiera de estas afecciones está funcionando.
Valores normales
• Neutrófilos: 40 a 60%
• Linfocitos: 20 a 40%
• Monocitos: 2 a 8%
• Eosinófilos: 1 a 4%
• Basófilos: 0,5 a 1%
• En banda: 0 a 3%
Significado de los resultados anormales
Cualquier infección o estrés agudo ocasiona un aumento en la producción de GB.
Los conteos altos de glóbulos blancos pueden deberse a inflamación, una
respuesta inmunitaria o hemopatías como la leucemia. Es importante saber que el
aumento anormal de un tipo de leucocito puede causar una disminución en los
porcentajes de otros tipos de glóbulos blancos.
Un aumento del porcentaje de neutrófilos puede deberse a:

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• Infección aguda, Eclampsia, Gota, Leucemia mielógena, artritis reumatoidea,
Fiebre reumática, Estrés agudo ,Tiroiditis ,Traumatismo.
Una disminución en el porcentaje de neutrófilos puede deberse a:
• Anemia aplásica, Quimioterapia, Gripe, Infección bacteriana generalizada,
Radioterapia.
Un aumento en el porcentaje de linfocitos puede deberse a:
• Infección bacteriana crónica, Hepatitis infecciosa, Mononucleosis infecciosa,
Leucemia linfocítica, Mieloma múltiple, Infección viral (como mononucleosis
infecciosa, paperas, sarampión), recuperación de una infección bacteriana.
Una disminución en el porcentaje de linfocitos puede deberse a:
• Quimioterapia Infección por VIH, Leucemia, Radioterapia, Sepsis.
Un aumento del porcentaje de monocitos puede deberse a:
• Enfermedad inflamatoria crónica, Infección parasitaria, Tuberculosis,
Infección viral (por ejemplo, mononucleosis infecciosa, paperas, sarampión)
Un aumento en el porcentaje de eosinófilos puede deberse a:
• Reacción alérgica, Infección parasitaria, enfermedad de Hodgkin.
Una disminución en el porcentaje de basófilos puede deberse a:
• Reacción alérgica aguda.
Cuáles son los riesgos: Sangrado excesivo, Desmayo o sensación de mareo,
Hematoma (acumulación de sangre debajo de la piel), Infección (un riesgo leve en
cualquier momento que se presente ruptura de la piel), Punciones múltiples para
localizar las venas.
Consideraciones especiales:
Las venas y arterias varían en tamaño de un paciente a otro y de un lado del
cuerpo a otro, por esta razón puede ser más difícil obtener una muestra de sangre
de algunas personas que de otras.

III.- RESULTADOS:
El Examen de diferencial sanguíneo es la prueba que mide el porcentaje de cada
GB, la cantidad de hemoglobina y de hematocrito. También llmado biometría

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hemática con diferencial, cuadro hemático con diferencial, hemograma con
formula leucocitaria y RSC con diferencial.

IV.- CONCLUSIONES:
El desarrollo de la formula junto con la tecnología moderna tiene la importancia
necesaria para ayudar en el diagnostico precoz y de muchas enfermedades que
puede producir una deficiencia de leucocitos.

PRACTICA Nº 04
RECONOCIMIENTO ANATOMICO DE LOS ORGANOS LINFOIDES
PRIMARIOS Y SECUNDARIOS

I.- INTRODUCCION:

Las células que participan en las respuestas inmunitarias se encuentran

organizadas formando tejidos y órganos, con objeto de llevar a cabo sus funciones
con la máxima eficacia. El conjunto de estas estructuras se denomina sistema
linfoide.

El sistema está formado por linfocitos, células accesorias (macrófagos y células

presentadoras de antígeno) y, en algunos tejidos, células epiteliales, puede estar
organizado en forma de órganos encapsulados aislados o consistir en
acumulaciones de tejido linfoide difuso. Los principales órganos y tejidos se
clasifican en primarias (centrales) y secundarias (periféricas).

Los primarios son los lugares en los que se produce mayoritariamente la

linfopoyesis (desarrollo de los linfocitos). En ellos, los linfocitos se diferencian a
partir de las células madre linfoides, proliferan y dan lugar, finalmente, a células
maduras funcionales. En los mamíferos, las células T maduran en el timo,
mientras que las células B, maduran en las células del feto y en la medula ósea;

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 11
las células B de las aves se desarrollan en un órgano especializado, denominado
bolsa de Fabricio.

El timo en los mamíferos (órgano bilobulado) está situado en la cavidad torácica,

por encima del corazón y los grandes vasos sanguíneos, en cada lóbulo las
células linfoides (timocitos) se encuentran repartidas entre la zona cortical externa
(en esta zona se agrupan densamente la mayoría de los timocitos relativamente
inmaduros en fase de proliferación) y una medula interna (las células que se
encuentran en esta zona son más maduras). El timo de los mamíferos
experimenta una involución a lo largo del tiempo, en los seres humanos la atrofia
comienza en el momento de la pubertad y prosigue a lo largo de toda la vida del
individuo.

Las aves, presentan un órgano especializado, denominado Bolsa de Fabricio, que

permite el desarrollo de las células B; este órgano es una sección modificada de la
pared dorsal de la cloaca, está compuesto de unos pliegues o proyecciones
(parecidas a las vellosidades intestinales) dirigidos hacia una cavidad central.

Los órganos linfoides secundarios son: el Bazo, los ganglios linfáticos y los tejidos
asociados a mucosas, entre los que se encuentran las amígdalas y las Placas de
Peyer del intestino. Estos proporcionan a los linfocitos un entorno en el que estos
pueden interactuar entre sí con las células accesorias y con los antígenos.
También son los encargados de diseminar la respuesta inmunitaria. En estos
órganos se produce la migración de los linfocitos maduros (linfocitos que han
concluido su maduración) de los órganos linfoides primarios.

El Bazo se encuentra situado en el cuadrante superior izquierdo del abdomen,

detrás del estómago y próximo al diafragma. Está rodeado externamente por una
capsula formada por fibras de colágeno que penetra en el parénquima del órgano
en forma de trabéculas. Este órgano contiene dos tipos principales de tejidos, la
pulpa roja (formado por sinusoide y cordones celulares, que contienen macrófagos
residentes, eritrocitos, plaquetas, granulocitos, linfocitos y numerosas células
plasmáticas) y la pulpa blanca (formada por tejido linfoide, la mayor parte del cual

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 12
está dispuesto alrededor de una arteriola central, y que se denomina capa linfoide
periarteriolar).
Los Ganglios linfáticos, forman parte de una red que filtra los antígenos contenidos
en el líquido intersticial de los tejidos y en la linfa durante el transporte de estos
líquidos desde la eriferia hasta el conducto torácico. Los ganglios linfáticos se
suelen encontrar situados en los puntos de ramificación de los vasos linfáticos. A
los ganglios linfáticos que protegen a la piel (son superficiales) se denomina
ganglios somáticos y a los profundos que protegen a las mucosas respiratorias,
digestivas y genitourinarias, se les denomina ganglios viscerales. A la mayor parte
de tejidos linfoides no organizado se encuentra asociado a las mucosas y se
denominan tejido linfoide asociado a mucosas (TLAM); entre estos tejidos se
puede mencionar a las amígdalas de los seres humanos, que contiene una
cantidad considerable de tejido linfoide, que en muchas ocasiones presenta una
gran cantidad de centros germinales. En los bronquios y en el tracto genitourinario
también se encuentran acumulaciones parecidas de tejido linfoide.
OBJETIVOS:
- Reconocer los diferentes órganos, como el Timo, Bazo y Bolsa de Fabricio en las
aves.
- Reconocer los diferentes órganos, como el Timo, Bazo, Ganglios Linfáticos
(Mesentéricos y otros) y Placas de Peyer en los mamíferos.

II.- MATERIALES:
2.1. Material Biológico:
- Ave: 09 Gallus gallus “Pollitos”
- Mamífero: 03 Mus musculus albinus “ratón blanco”
2.2. Material de laboratorio:
- Estuche de disección: Bisturí, tijeras, pinzas
- Guantes quirúrgicos
- Algodón hidrofílico
- Alfileres
- Base de madera o teknopor de 20x30 cm2

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2.3. Reactivos y/o soluciones:
- Fenol
- Agua destilada
III.- PROCEDIMIENTO:
3.1. Muerte y disección del Ave (pollito):
- La muerte del animal se realizará mediante asfixiamiento; tapando con los dedos
las fosas nasales y haciendo un apretamiento en los sacos aéreos, con la finalidad
de sacar todo el aire y así facilitar la muerte rápida del espécimen.
- Muerto el animal se procederá a la disección y observación de los diferentes
órganos linfoides.

3.2. Muerte y disección del Mamífero (ratones blancos):

- Se colocarán a los animales en un recipiente, conteniendo algodón embebido en
solución de fenol, posteriormente se tapará.
- Muerto el animal se procederá a la disección y observación de los diferentes
órganos linfoides.
IV.- RESULTADOS:
Principales órganos linfoides del Ave
El timo esta formado por varios lobulos que se encuentran íntimamente unidos a
las vena yugular y nervio vago, producen linfocitos T. las aves presentan un
órgano linfoide especial llamado BOLSA DE FABRICIO donde se desarrollan y
diferencian linfocitos B, productores de anticuerpos, estos dos órganos junto con la
medula ósea constituyen los llamados órganos linfoides primarios. Una vez
producidas las células defensivas, estas se distribuirán en los órganos linfoides
secundarios. Dentro de estos, se encuentran la GLANDULA HARDER (rica en
linfocitos B y células plasmáticas), el tejido linfoide asociado a la mucosa intestinal
(tonsilas cecales), tejido linfoide asociado al sistema respiratorio, bazo, nódulos
linfáticos acapsulados tibioplíteros.

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 14
 Sistema linfoide del ave (partes)

Principales órganos linfoides del Mamífero

Mus musculus albinus “ratón blanco”

Dentro de los órganos linfoides primarios esta el TIMO y la Medula Osea, los
secundarios o periféricos son el BAZO, los Ganglios Linfaticos y el TEJIDO
LINFOIDE ASOCIADO A MUCOSAS, como las placas de Peyer (agregados de
tejido linfoide que no forman órganos encapsulados propiamente dichos).

Al abrir el ratón intentaremos encontrar los ganglios linfáticos inguinales, los

cuales se observarán como pequeños puntos blancos (o durezas) en las uniones
de los vasos sanguíneos. A continuación, cortando el peritoneo podemos observar
en la parte derecha del ratón y detrás del estómago el bazo que es de color rojizo
debido a la gran cantidad de hematíes que contiene, de forma alargada, es
fácilmente distinguible (no confundirlo con el hígado). Desenrollando el intestino
del ratón, distinguiremos las placas de Peyer que se podrán observar como unos
pequeños gránulos sobre el intestino delgado.
A continuación, rompiendo el esternón, observaremos en la parte superior del
corazón un órgano de color blanco bilobulado que no hay que confundir con los

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 15
pulmones. Este órgano es el timo. En ocasiones los dos lóbulos se encuentran
muy juntos por lo que da el aspecto de presentar un único lóbulo. A la hora de
romper el esternón hemos de tener cuidado para no romper el corazón y evitar de
esta forma que se produzca una hemorragia que nos impediría distinguir el timo y
los pulmones con facilidad. Los pulmones, situados al lado del corazón, se verán
colapsados debido a que presentan presión negativa, presentan color rosáceo.

V. CONCLUSIONES:

La organización de los tejidos linfoides en las aves es diferente a la de los mamíferos. Las
aves cuentan con un arsenal de células especializadas en la defensa en la que destacan:
linfocitos T (son responsables de la inmunidad celular y de la inmunidad humoral T
dependiente y representa el 60-70% de los linfocitos circulantes) y linfocitos B (son los
responsables de la síntesis de anticuerpos y constituyen el 30% de los linfocitos
circulantes). Producen anticuerpos de clase IgG o IgY, IgM e IgA. Estos anticuerpos son
transferidos a la yema a través de la sangre de la gallina reproductora, por lo que los
niveles séricos de inmunoglobulinas en la madre serán igual al presente en la yema de
huevo. Esta inmunidad es variable y depende del estado inmunológico de la gallina. El
tiempo de retención de anticuerpos también es variable y depende de la concentración
M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 16
materna inicial, aunque la mayoría de anticuerpos habrán desaparecido en la tercera
semana y completamente a la cuarta.
Al abrir el ratón intentaremos encontrar los ganglios linfáticos inguinales, los cuales se
observar como pequeños puntos blancos (o durezas) en las uniones de los vagos
sanguinos.

PRACTICA Nº 05
OBSERVACIÓN Y RECONOCIMIENTO DE LINFOCITOS VIABLES

1.- INTRODUCCION:
La respuesta inmune adaptativa mediada por linfocitos es estudiada mediante:
Aislamiento → Separación poblaciones-subpoblaciones → comportamiento
No es posible diferenciar los linfocitos T de los B por microscopía ordinaria, ni en
la sangre ni en los órganos linfoides, aunque sí se observan algunas diferencias
por microscopía electrónica de barrido. No obstante, se disponen de varios
métodos que permiten diferenciar y cuantificar los linfocitos, sus diferentes
subpoblaciones e incluso su capacidad de responder a distintos antígenos.
Los métodos para el estudio de los linfocitos, más utilizados en la actualidad, los
podemos agrupar en:
-Determinación de marcadores y receptores de membrana.
-Determinación de antígenos de membrana.
-Pruebas funcionales.
- Aislamiento de linfocitos: Gradiente sobre Ficoll / Hypaque (Boyum 1968)
Humanos: Sangre Periférica – Órganos
M. experimental: Bazo, Timo y NL.

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 17
1.- Marcadores y receptores de membrana: Estos métodos han sido
tradicionalmente utilizados para diferenciar y cuantificar poblaciones de linfocitos B
y T. Estos marcadores convencionales, están basados en las características
específicas de ciertos receptores de membrana, presentes en ambas poblaciones
de linfocitos. Los principales marcadores son:
Linfocitos B: Inmunoglobulinas de superficie
Linfocitos T: Rosetas con eritrocitos de carnero

2.- MATERIALES:
02 ampollas de Lactato ringer x10ml 01 Cavia porcellus “cuy o cobayo”
01 Gallus gallus “Pollo” 02 Placas petri 15x100 mm

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01 Estuche de disección 01 gotero
Algodón hidrofílico 01 pipeta de 5 ml
01 Embudo de vidrio Laminas porta y cubreobjetos
Tubos de ensayo 13x100 mm 01 Mortero
Solución Turk o azul de metileno 02 pares de guantes
01 Gradilla 01 base de madera o teknopor

3.- PROCEDIMIENTO:

-Extraer el Timo y el bazo del cuy y del ave. Lavar con solución salina.
-Triturar el Timo y el bazo en el mortero, con el lactato ringer.
-Filtrar con un algodón a un tubo de ensayo.
-Agregar 2 - 5 gotas del Líquido de Turk o azul de metileno.
-Dejar en reposos por 5 - 10 minutos.
-Extraer con una pipeta el contenido a la lámina.
-Observar a 10x y 40x.
4.- RESULTADOS:

5.- CONCLUSIONES:

Existen 2 tipos de linfocitos, linfocitos T y B, los cuales maduran a partir de

precursores linfoides comunes presentes en la médula ósea. Cada linfocito

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 19
expresa un único tipo de receptor que reconoce un antígeno de forma específica,
lo que se conoce como receptores clonotípicos. Los receptores de antígeno de los
linfocitos T (TCR) reconocen antígenos peptídicos, presentados por las moléculas
del complejo principal de histocompatibilidad en la membrana de las células
presentadoras de antígeno1, mientras que los receptores de antígeno de los
linfocitos B (BCR) reconocen antígenos solubles.

PRACTICA Nº 06
PRUEBAS INMUNOLÓGICAS: reacción antígeno – anticuerpo

I.- INTRODUCCION:

Se define como antígeno a toda aquella sustancia que al ser introducida a

un organismo es capaz de inducir una respuesta inmunológica, ya sea por
anticuerpos específicos o por células linfocitarias (LcT) que van a reaccionar con
el Ag inductor.

Generalmente los antígenos se presentan en la naturaleza como

componentes de membranas celulares, cápsulas bacterianas, cilios y flagelos de
bacterias y protozoos, cápsides virales, toxinas bacterianas, grupos sanguíneos,
etc. También se encuentran como alergenos capaces de producir alergias, en el
polvo de habitaciones, polen, caspa, aceites vegetales, pelos, alimentos, etc.

Los antígenos deben tener un alto peso molecular y un cierto grado de

complejidad, y deben ser reconocidos como extraños por el organismo. Los
mejores antígenos son las proteínas. La región del antígeno que interactúa con las
células y moléculas del sistema inmune se llama determinante antígeno o epitopo.

Anticuerpos. De acuerdo con sus características electroforéticas se

denominan inmunoglobulinas, la mayoría son gama-globulinas.
Estructuralmente los anticuerpos están constituidos por cuatro cadenas
polipeptídicas, dos largas y dos cortas. Se describe una porción constante en
que la secuencia de aminoácidos no varía, y una porción variable en que la
secuencia de aminoácidos varía de acuerdo con la especificidad del anticuerpo, y
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es en esta región donde se produce la unión estereoquímica entre el anticuerpo y
el determinante antigénico que indujo su formación.

Se conocen cinco clases o isotipos de anticuerpos o inmunoglobulinas:

- IgM. Inmunoglobulina M o macroglobulina (IgM). Es la primera que produce el

organismo en respuesta al estímulo antigénico. Tiene un alto peso molecular
(900.000). Es un pentámero.
- IgG. Inmunoglobulina G (IgG). Tiene un peso molecular de 180.000 y es la
principal inmunoglobulina sérica. Es un monómero.
- IgA. Inmunoglobulina A (IgA), de acción local; actúa a nivel de mucosa,
principalmente en el tracto respiratorio y digestivo, como IgA secretoria.
- IgE. Inmunoglobulina E o reaginina (IgE). Es un anticuerpo esencialmente
citofílico que al unirse a células cebadas o a basófilos, y reaccionar con el
alergeno, induce a la célula a producir una amina vasoactiva, histamina, la que
participa activamente en los fenómenos alérgicos o de hipersensibilidad.
Reacción antígeno-anticuerpo:
Se entiende por reacción antígeno-anticuerpo (Rx Ag-Ac) a la unión
específica entre un anticuerpo (porción variable) y el determinante antigénico
inductor. Esta reacción es reversible, sólo se mantiene por fuerzas no covalentes
de carácter débil que permiten la unión del antígeno con su anticuerpo específico.
Se denomina afinidad a la fuerza de unión entre antígeno y anticuerpo.
Genéricamente, se denominan como pruebas serológicas a aquellos
métodos de diagnóstico de enfermedades infecciosas, cuya base es una reacción
antígeno-anticuerpo, y que dentro del amplio campo de la inmunología se estudian
en el área de la serología.

Las pruebas serológicas deben ser realizadas en forma controlada, con el

fin de evitar problemas de interpretación debido a la presentación de resultados
falsos positivos o falsos negativos. Estas pruebas deben ser altamente específicas
y sensibles para ser empleadas con éxito en el diagnóstico de agentes etiológicos
infecciosos (virus, bacterias o parásitos).

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 Como pruebas de diagnóstico, las pruebas serológicas se pueden realizar
para identificar un virus, bacteria o parásito, o bien para conocer la presencia y la
cantidad de anticuerpos que puede tener una persona o animal, producto de una
infección natural o una vacunación. Cualquiera sea el uso a que se destine la
prueba serológica, se debe considerar que para identificar un virus, bacteria o
parásito se deben emplear anticuerpos conocidos y si se quiere identificar y/o
cuantificar anticuerpos, se deben emplear virus, bacterias o parásitos conocidos.

Las pruebas serológicas se han clasificado, en forma muy general, según su

capacidad de producir un efecto visible o no, producto de la reacción antígeno
anticuerpo. Aquellas pruebas en que no se visualiza la reacción se llaman
primarias y para hacer manifiesta la reacción se debe adicionar algunos
elementos para hacerlas visibles. Así, si al anticuerpo se le pega un elemento
fluorescente se podrá observar fluorescencia como indicativo que hubo unión
antígeno anticuerpo. Si al anticuerpo se le adiciona una enzima como por ej.
seroxidasa, se podrá observar la aparición de un color (producto de la acción de la
enzima sobre un sustrato que genera color). Como seña de que hubo unión
antígeno anticuerpo.

Las pruebas que usan compuestos fluorescentes unidos a inmunoglobulinas

se denominan Pruebas de Inmunofluorescencia y las pruebas que adicionan
una enzima al anticuerpo se llaman inmunoenzimáticas. La prueba de ELISA
(enzyme linked immunosorbent assaz) es una prueba inmunoenzimática.

Las pruebas serológicas secundarias se caracterizan porque producto de la

unión antígeno anticuerpo se produce una reacción visible, sin necesidad de
adicionar elementos ajenos a la reacción.

La reacción antígeno-anticuerpo se visualiza en diferentes formas,

dependiendo de la presentación del antígeno, así si son células serán aglutinadas
y en este caso el antígeno se denomina aglutinógeno y el anticuerpo aglutinina.
Una típica reacción de aglutinación es la reacción de Hudlesson utilizada para el
diagnóstico de la brucelosis bovina.

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 En el caso de la precipitación, el antígeno es soluble y se denomina
precipitinógeno. El anticuerpo o precipitina, al unirse con el antígeno forma un
complejo antígeno-anticuerpo que precipita debido a que es insoluble, por lo que
la reacción se visualiza fácilmente en forma de líneas, bandas o anillos de
precipitaciones. Esta es una prueba sencilla y económica, pero que tiene una baja
sensibilidad, ya que requiere de una gran cantidad de antígenos y anticuerpos
para que se produzca el complejo antígeno-anticuerpo insoluble.

La prueba de fijación del complemento es más compleja y requiere de dos

sistemas antígeno-anticuerpo, uno, formado por glóbulos rojos de cordero y
anticuerpos antiglóbulos rojos y el otro, formado por el antígeno o anticuerpo en
estudio. El complemento es el elemento indicador que produce la lisis de los
glóbulos rojos (hemólisis), lo que en último término indica si la reacción es positiva
o negativa. Se utiliza en el diagnóstico de la Fiebre Aftosa.

La prueba de inhibición de la hemoaglutinación, en que los anticuerpos

(antivirus) impiden la unión del virus con los glóbulos rojos, se usa en el
diagnóstico de virus que tienen la capacidad de aglutinar glóbulos rojos como es el
caso del virus de la influenza animal o humana.

Prueba de precipitación o inmunodifusión:

La reacción de precipitación consiste en la formación de un complejo insoluble

que se forma al poner en contacto antígenos solubles con anticuerpos específicos.
En esta reacción participan los siguientes elementos:
1. Antígeno soluble o precipitinógeno, que puede ser un extracto de bacterias,
proteínas virales, toxinas o extractos de tejidos.
2. Anticuerpo, llamado precipitina (IgG, IgM).
3. Electrolito, indispensable para visualizar la reacción, constituido por una
solución salina o suero fisiológico (NaCl 0,85%; 0,15 M).
4. Agar (noble), a una concentración dada, lo que permite la difusión de los
antígenos y anticuerpos.

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MÉTODO DE OUCHTERLONY O Inmunodifusión doble: Se utiliza Agar noble,
puro y libre de sales, preparado al 1% en salina fisiológica o solución "buffer" con
un pH ligeramente alcalino. El Agar fundido se vierte en una placa Petri o sobre un
portaobjeto y se deja solidificar a temperatura ambiente. Luego se abren
cavidades de acuerdo a un modelo predeterminado; el antígeno se coloca en las
cavidades centrales y los sueros (anticuerpos) en las cavidades periféricas. La
incubación se realiza a 37°C y en ambiente húmedo. Los resultados se leen 24 a
48 horas después, observándose líneas de precipitación nítidas entre las
cavidades que contienen el antígeno y los anticuerpos (sueros).

PROTEÍNA C REACTIVA (PCR): La PCR tiene una alta sensibilidad, es un

examen que mide la cantidad de una proteína en la sangre que indica inflamación
aguda. La Proteína C reactiva es una proteína plasmática, una proteína de fase
aguda producida por el hígado y por los adipocitos. Es miembro de la familia de
las pentraxinas. No debe ser confundida con el péptido C ni con la Proteína C.
La proteína C reactiva se produce en el hígado cuando hay una infección o
inflamación aguda en el cuerpo.
Su importancia es que reacciona con el sistema del complemento que es un
sistema de defensa contra agresiones externas del cuerpo humano.

FACTOR REUMATOIDE (Aglutinación en placa para el diagnostico de artritis

reumatoidea): En el 80% de los pacientes con artritis reumatoide se encuentra un
anticuerpo en la sangre llamado factor reumatoide, anticuerpo de tipo IgG o IgM;
se desconoce si es el causante de la destrucción de cartílago articular que
caracteriza la enfermedad. Estudios demuestran que se trata de fallas en la
regulación de estos anticuerpos.

Observación y análisis de los resultados: Analizar la especificidad de la

reacción de precipitación observada y su sensibilidad; pH y temperatura
necesarios, y especialmente, la importancia que tienen las concentraciones
relativas del antígeno y los anticuerpos para que la reacción se produzca ya que,

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si existe exceso de uno de los reactivos, sea de antígeno o de anticuerpo, la
reacción no se produce, aunque existan antígenos y anticuerpos específicos.

II.- MATERIAL:
Agar Noble 1%
Suero fisiológico
Placas de Petri o portaobjetos
Pipetas Pasteur, Estufa de cultivo a 37°C.
Suero sanguíneo con anticuerpos para el antígeno usado en la prueba
Suero sanguíneo control (sin anticuerpos)
Antígenos (soluble), molde sacabocados

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V. CONCLUSIONES:

Cuando un AC entra en contacto con un Ag contra el que está dirigido, se unen

formando el complejo Ag- Ac.
Del grado de adaptación entre ambas moléculas (llave – cerradura) que permite
que permite que ambas moléculas estén unidas.
No es una situación fija no dinámica, tiene movimiento por la estructura molecular
del anticuerpo, y la estructura del antígeno y la zona de exposición que en algún
minuto sean más próximos o como el medio va a incidir en que esa situación se
mantenga con un cierto nivel de estabilidad o movimiento de la estructura.

PRACTICA Nº 07
TIPIFICACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS: Grupos A, B, AB y O, y
grupo Rhesus (Rh)

I.- INTRODUCCION:

En el año 1900 Landsteiner descubrió que los glóbulos rojos humanos podían ser
clasificados en A, B, AB u O de acuerdo a la presencia (grupos A, B, o AB) o
ausencia (grupo O) de antígenos altamente reactivos en su superficie. También
demostró que existen anticuerpos (aglutininas) para los antígenos A y B y que el
suero de un individuo no contiene anticuerpos para el antígeno presente en sus
glóbulos rojos pero si contra los que no posee.

El procedimiento de la determinación de los grupos sanguíneos es una de las

metodologías habituales e imprescindibles para procesos médicos o clínicos como
es la transfusión de sangre. La razón está en que el sistema inmunológico
puede generar un rechazo por que reacciona a la presencia de agentes extraños.

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Este tipo de reacción esta mediada por anticuerpos y es fácilmente observable por
reacciones de aglutinación. Se conocen más de 20 grupos de antígenos de los
glóbulos rojos codificados en locus genéticos diversos, para los cuales existen
múltiples variantes alélicas. El resultado son más de 200 antígenos eritrocitarios
identificables.
Estos antígenos varían en su inmunogenicidad. Los más importantes para efectos
de transfusiones sanguíneas son los antígenos del sistema H / ABO y los del
sistema Rhesus (Rh).
A continuación se presenta una reseña de estos dos sistemas que le
permitirán comprender con mayor facilidad el práctico a realizar.

Sistemas H y ABO:
En estos sistemas los epítopos responsables son carbohidratos que aparecen
como glicoesfingolípidos en la membrana plasmática y también como
glicoproteínas. El gen H codifica la enzima fucosil transferasa, que agrega
fucosa a una cadena oligosacárida precursora. Los tres últimos azúcares de
la cadena se denominan antígeno H (Figura 1). En otro locus aparte está el
sistema ABO, con tres alelos. El alelo A codifica una enzima transferasa que une
N-acetil galactosamina a la cadena H, mientras que el alelo B codifica otra enzima
transferasa que une una galactosa.
El alelo O no produce la enzima transferasa y por tanto no modifica la sustancia H.
El azúcar unido al carbono 3 de la galactosa determina la actividad antigénica. La
galactosa no acepta azúcar en el carbono 3 a no ser que haya fucosa unida al
carbono 2.
Figura 1. “Esquema de los residuos Oligosacáridos de los sistema H/ABO”

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 Cabe destacar
que estos genes
son codominantes, es decir que, los individuos que expresan los alelos A y B
tendrán Oligosacáridos con los dos tipos de modificaciones. Así, se
distinguen 4 grupos dependiendo de cómo se presenta el genotipo, teniendo: A,
B, AB y O. La importancia asociada a las transfusiones de estos antígenos radica
en que las personas de un grupo sintetizan anticuerpos frente a los Oligosacáridos
que no están en sus glóbulos rojos (Tabla 1).
Estos anticuerpos, que se denominan isoaglutininas y que suelen ser IgM,
aparecen en grandes cantidades en circulación sin necesidad de exposición
previa a sangre de otros grupos. La razón parece estar en la reactividad cruzada
de sustancias presentes en bacterias de la flora intestinal.

Tabla 1: Tabla de los antígenos eritrocitarios asociados a los grupos sanguíneo

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 GRUPO GENOTIPO ANTIGENOS ANTICUERPOS
SANGUINEO ERITROCITARIOS SERICOS
A AA, AO A Anti-B
B BB, BO B Anti-A
AB AB AyB -
O OO H Anti-A, Anti-B

Sistema Rhesus:
Se han identificado más de 40 antígenos del sistema Rh aunque no se sabe
cuántos genes son responsables de este sistema. Son proteínas integrales de
membrana con un contenido lipídico alto. D es el antígeno Rh más inmunogénico y
por tanto el más importante a efectos transfusionales. La presencia de D da lugar
al Rh+, mientras que la ausencia (d) da lugar al Rh-. Los anticuerpos anti D, que
son IgG, aparecen en la circulación de los individuos Rh- sólo tras una
exposición previa a sangre D, por ejemplo por una transfusión de hematíes o tras
la gestación de un feto D.
Determinación de antígenos eritrocitarios y anticuerpos séricos:
Antes de una transfusión se deben analizar los eritrocitos del receptor para ABO y
D mediante antisueros anti-A, anti-B y anti-D. Simultáneamente se analiza el
suero para detectar anticuerpos contra antígeno eritrocitarios (isoaglutininas),
mediante hematíes A y B previamente tipificados. Las reacciones positivas dan
lugar a la aglutinación de los glóbulos rojos. Para asignar un grupo sanguíneo,
ambas pruebas deben dar un resultado coincidente. Los resultados
discrepantes deben analizarse cuidadosamente. Un test adicional es la prueba
cruzada, que examina la compatibilidad entre suero del receptor con los
hematíes del/los donantes. Para ello, hematíes lavados del donante se mezclan
con suero del receptor, se incuban, se centrifuga y se examina para hemólisis y
aglutinación.
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
- Analizar e interpretar reacciones de aglutinación.
- Determinar los grupos ABO y Rh (D) en hematíes.
- Determinar ABO en suero.
- Obtener antisueros para tipaje.

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 - Titular un antisuero.

III.- METODOLOGÍA EXPERIMENTAL:

Determinación de ABO y Rh (D) en hematíes:
1) Preparar un portaobjetos y un tubo Eppendorf rotulado con las iniciales
del individuo (se debe preparar uno por cada integrante del grupo). En este
último se pipetea 1 ml de suero salino fisiológico.
2) Desinfecte un dedo con un algodón humedecido en alcohol al 70% y se pincha
con la lanceta.
3) Sobre un portaobjetos se depositan tres gotas de aproximadamente 0.5 cm de
diámetro (25-50 µl) bien separadas. (Pueden realizarlo en portaobjetos
separados si les complica trabajar con volúmenes tan pequeños)
4) Tomar 10 µl de sangre y pipetearlos en el tubo eppendorf (maneje con delicadeza
las micropipetas). Guardar a temperatura ambiente, se procesará al final.
5) Sobre cada gota de sangre del porta se pipetean 25 µl de antisuero (cambie
la punta de la micropipeta y mantenga un recipiente con alcohol yodado
donde ira agregando las puntas sucias). El orden recomendable es anti-A, anti-
B, anti-D.
6) Mezclar con una punta de pipeta durante unos segundos.
7) Determinar la aglutinación e interpretar el resultado. Puede visualizarse en
el microscopio en caso de reacción muy débil.
8) Determinar la frecuencia de cada grupo en la clase y compararla con las
frecuencias establecidas.
Grupo % en clase
A
B
AB
O
Rh negativo

Lavado y preparación de eritrocitos al 2%:

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 1) Rotular los tubos eppendorf de los 10 µl de sangre con el grupo hemático
obtenido (A, B, AB, O). (El que acaba de determinar).
2) Centrifugar el tubo 1 minuto a velocidad alta. (15.000 a 20.000 r.p.m) si la
centrifuga no alcanza las velocidades señaladas, haga una razón de 2 a 3 ciclos)
3) Descartar el sobrenadante, realícelo con la micropipeta con cuidado de no pasar
a llevar el pellet.
4) Resuspender el pellet y añadir 1ml de suero fisiológico.
5) Repetir los pasos 2 y 3.
6) Resuspender en 490 µl de suero fisiológico. A esto se denomina hematíes al
2% (v/v). Estos hematíes serán compartidos por todos los alumnos del grupo.

Determinación de ABO en suero o plasma

1) Centrifugar la sangre 5 minutos a 4000 r.p.m.
2) Extraer el suero (o plasma) y depositarlo en un tubo eppendorf.
3) Lavar y diluir hematíes A y B al 2% (v/v) en suero fisiológico.
4) Pipetear 50 µl de suero en dos tubos de poliestireno de 10x70 o en dos pocillos.
Pueden también prepararse controles negativos (suero fisiológico) y positivos
(suero anti-A, B).
5) Pipetear 25 µl de hematíes A en un tubo (o pocillo) y hematíes B en el otro y
mezclar.
6) Centrifugar a 400xg 15 segundos.
7) Dispersar el pellet y determinar aglutinación.

Obtención y titulación de antisueros anti-A, anti-B y anti-A,B a partir de

muestras de plasma:
1) Tomar 5 tubos de sangre anticoagulada con EDTA elegidos al azar.
2) Centrifugar la sangre 5 minutos a 400xg.
3) Extraer cuidadosamente el plasma y depositar en un tubo eppendorf rotulado
con el número de la muestra. El pellet celular se reserva por si fuera
necesario posteriormente.
4) En una gradilla colocar 15 tubos de poliestireno de 10x70 (5 filas x 3 columnas) (o
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 utilizar una placa microtiter de fondo en U)
5) Pipetear 50 µl de cada plasma en los 3 tubos (pocillos) de cada fila (Tabla
de resultados).
6) En los 5 tubos de la primera columna pipetear 25 µl de hematíes A. En las
columnas 2ª y 3ª pipetear 25 µl de hematíes B y O respectivamente. Puede
procesarse una 4ª columna de tubos si se hubieran encontrado hematíes AB
(será un control positivo).
7) Incubar 5 minutos.
8) Centrifugar a 400xg 15 segundos.
9) Dispersar el pellet y determinar aglutinación. (Si se ha trabajado en placa,
dispersar el pellet con una pipeta y observar al microscopio invertido,
centrándose en el fondo del pocillo). Calificar cada tubo o pocillo con -, + y
++ según la aglutinación observada y anotar en la tabla de resultados.
10) Preparar pooles de antisueros anti-A, anti-B y anti-A,B mezclando todos
los obtenidos en el grupo de prácticas.
11) Titular los pooles de antisueros obtenidos (uno cada pareja de
prácticas).Para ello, llevar a cabo una dilución seriada 1/2 y analizar la
aglutinación de una cantidad constante de hematíes A o B, tal y como se
describe a continuación.
12) Tomar 8 tubos y rotular 1, 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64 y 1/128.
13) Pipetear 50 µl de suero salino fisiológico en todos los tubos excepto en el
rotulado como 1.
14) Pipetear 50 µl de antisuero en el primer y segundo tubo y mezclar. Del
segundo tubo tomar 50 µl y pasarlos al siguiente, y así sucesivamente.
Descartar 50 µl del último tubo.
15) Pipetear 25 µl de hematíes que correspondan y mezclar.
16) Incubar 5 minutos.
17) Centrifugar a 400xg 15 segundos.
18) Dispersar el pellet y determinar aglutinación. Anotar en la tabla.
19) El título del antisuero será la inversa de la máxima dilución aglutinante

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IV.- TABLA DE RESULTADOS:

HEMATIES A B 0
PLASMA
PLASMA 1 A B 0
PLASMA 2 AB AB -
PLASMA 3 - - -
PLASMA 4 - -
PLASMA 5

V.- CONCLUSIONES:
Epitopos ABO se encuentran en muchas otras células apartw de los eritrocitos. Se
han descrito 11 subgrupos de A. los mas importantes son A1 y A2. Los hematíes
A1 tiene aproximadamente 1 millon de copias mientras que los A2 tienen 350 mil
aproximadamente un 78% de los individuos A hijo A1 y 22% hijo A2. La sangre AB
también puede dividirse en tipos A1B y 12B los A o B débiles darán aglutinación
anti-A-B pero con los otros antisueros.

PRACTICA Nº 08
Compatibilidad sanguínea: Prueba cruzada.

I.- INTRODUCCION:

Es una prueba inmunohematológica cuyo principio es la hemaglutinación y

su objetivo es evitar la destrucción eritrocitaria en un receptor. Aunque la
transfusión sanguínea se ha convertido en rutina en la práctica clínica, todavía
ocasiona peligros definidos, inmunitarios e infecciosos. La mayor parte de los riesgos

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puede evitarse mediante pruebas de ambas sangres, la del donador y la del
receptor, antes de la transfusión. La hepatitis sigue siendo la complicación más
importante a pesar del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) como una
consecuencia probable de transfusiones de sangre y sus componentes.
La transfusión sanguínea puede complicarse por reacción inmunológica o por
contaminación de agentes infecciosos.
Cuando se hacen pruebas cruzadas y selección de anticuerpos antes de la
transfusión, es muy raro que se presenten reacciones de incompatibilidad de los
eritrocitos. Las reacciones graves por lo general se deben a errores
administrativos en el rotulado de los tubos de muestra o la identificación correcta
del paciente.
La prueba cruzada de la sangre del donador con la del receptor puede
constar de dos partes, conocidas como fase mayor y fase menor.
La fase mayor consiste en mezclar los eritrocitos del donador con el suero
del receptor tanto en presencia como en ausencia del suero de Coombs, mientras
la fase menor consiste en mezclar los glóbulos rojos del receptor con el suero del
donador, con y sin el suero de Coombs. La fase mayor recibe ese nombre porque
permite descubrir en el suero del receptor los anticuerpos que suelen presentar la
causa más común de las reacciones hemolíticas graves o fatales ante las
transfusiones. La reacción a la transfusión suele ser leve, cuando se debe a
incompatibilidad en la fase menor de la prueba cruzada.
Conocido también como: Pruebas de compatibilidad sanguínea, Pruebas
cruzadas, Pruebas pretransfusionales o Cross match
FUNDAMENTO
Se ponen en contacto los glóbulos rojos del donador y el suero del
receptor, y los glóbulos rojos del receptor con el suero del donador, en presencia
del suero de Coombs, en solución albuminosa y liss.
OBJETIVO:
Determinar la compatibilidad sanguínea entre un donador y receptor.

II.- MATERIAL:

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1. Tubos de ensayo APARATOS.
2. Tubo vacutainer sin anticoagulante 1. Centrífuga
3. Tubo vacutainer con 2. Baño maría
anticoagulante 3. Refrigerador
4. Adaptador para vacutainer REACTIVOS.
5. Gradilla metálica 1. Solución salina 0.85%.
6. Pipetas Pasteur con bulbo 2. Albúmina Bobina 22% o 30%.
7. Termómetro de – 10°C a +110°C 3. Suero de Coombs.
8. Lanceta desechable MATERIAL BIOLÓGICO.
9. Torundas con alcohol 1. Glóbulos rojos al 5%
10. Jeringa desechable de 3.0 mL 2. Suero
11. Ligadura

III.- PROCEDIMIENTO:
1. Hacer una extracción de 3ml de sangre al donador y receptor.
2. Preparar una suspensión al 5% de glóbulos rojos en suero fisiológico en un
tubo de hemólisis, tanto del donador como del receptor.
3. Dejar coagular la sangre, desprender el coágulo por medio de un aplicador,
centrifugar a 3000r.p.m. durante 5 minutos, separar el suero por medio de una
pipeta Pasteur de ambos tubos.

PRUEBAS CRUZADAS (Salina):

1. Marcar tres tubos de la siguiente manera: Ds (prueba mayor), Rs (prueba menor)
y Ts (autotestigo).
2. Al tubo Ds colocar dos gotas de suero del receptor más una gota de glóbulos
rojos del donador y mezclar.
3. Al tubo Rs colocar dos gotas de suero del donador más una gota de glóbulos
rojos del receptor y mezclar.
4. Al tubo Ts colocar dos gotas del suero del donador más una gota de glóbulos
rojos del donador.

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5. Centrifugar los tubos Ds Rs y Ts a 3400 r.p.m. Durante 30 segundos y observar
si hay aglutinación.
6. Mezcle y centrifugue a 340 r.p.m. durante 30 segundos y observe si hay
aglutinación.
PRUEBAS CRUZADAS (Albúmina):
1. Marcar tres tubos de la siguiente manera: DA (prueba mayor), RA (prueba
menor) y TA (autotestigo).
2. Al tubo DA colocar dos gotas del suero del receptor más una gota de glóbulos
rojos de donador y mezcle.
3. Al tubo RA colocar dos gotas del suero del donador más una gota de glóbulos
rojos del receptor y mezcle.
4. Al tubo TA colocar dos gotas del suero del receptor más una gota de glóbulos
del receptor y mezcle.
5. Agregue a los tubos DA RA y TA albúmina bobina 2 gotas si es al 22% y dos
gotas si es al 30% y mezcle.
6. Centrifugue los tubos DA RA y TA a 3400 r.p.m. durante 90 segundos y observe
si hay aglutinación.
7. Si no hay hemoaglutinación incube a 37°C durante 15 minutos.
8. Saque los tubos DA RA y TA y centrifugue a 3400r.p.m. durante 90 segundos y
observe si hay aglutinación.
9. Si no hay aglutinación lave tres veces con solución salina isotónica.
10. En último lavado elimine totalmente la solución salina remanente.
11. Adicione a cada tubo DA RA y TA una gota de suero antiglobulina humana e
incubar 15 minutos a 37°C.
12. Mezcle y centrifugue a 3400r.p.m. durante 30 segundos y observe si hay
aglutinación.
13. Control de Coombs, realizar los mismo sin solución de albúmina y con solución
liss.

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IV.- RESULTADOS:

La prueba continúa incubándose a 37°C utilizando algunos de

los medios dereacción entre los cuales podemos mencionar: ALBUMINA solución al 22%: Añadir
3 gotas e incubar por lo menos 30 minutos,centrifugar 30 segundos y leer, después se realizan
tres lavados con soluciónsalina fisiológica al 0.9% y llevar el procedimiento hasta la fase de
Coombs. La albúmina podría influir en el segundo estadio de la aglutinación, por reducciónde la
carga negativa neta de los eritrocitos o alteración de la tensión superficialintercelular,
favoreciendo así la aglutinación de las células recubiertas deanticuerpos. PEG
(polietilenglicol). Añadir 2 gotas e incubar por lo menos 15 minutos con estereactivo no se
centrifuga se procede a realizar los lavados tres veces con soluciónsalina fisiológica al 0.9%.

V.- CONCLUSIONES:

CUESTIONARIO:
1. En una prueba cruzada se tiene como donador a un 0 Rh+ y como receptor
un ARh+:

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 a) Escriba como se observa la aglutinación en la prueba mayor.

Sirve para confirmar si existe compatibilidad ABO entre el receptor y el

donador. Detecta anticuerpos en el suero del paciente que no se hayan
demostrado en la prueba de tamizaje (porque el antígeno correspondiente no
estaba presente en las células detectoras o eritrocitos de fenotipo conocido,
PANEL). Se utilizan 2 gotas de suero del receptor más 1 gota de eritrocitos
lavados del donador

b) Escriba como se observa la aglutinación en la prueba menor.

Detecta anticuerpos irregulares en el suero del donador y ratifica algún error

de clasificación ABO/Rh. Se realiza con 2 gotas de suero o plasma del
donador más 1 gota de eritrocitos del receptor.

c) Escriba si son compatibles y ¿por qué?

Una detección de anticuerpos negativa no garantiza que el suero se encuentre

libre de anticuerpos eritrocitarios clínicamente significativos, sólo indica que no
contiene anticuerpos reactivos. Tampoco una prueba cruzada compatible
indica una supervivencia eritrocitaria normal, por ello debe realizarse
conjuntamente con un tamiz para anticuerpos, o bien diferentes técnicas tanto
para anticuerpos como pruebas cruzada

2. ¿Cuál es la importancia de las pruebas cruzadas?

El propósito de las pruebas cruzadas es determinar incompatibilidad
serológica entre el receptor y donador previo a la transfusión, y así prevenir
una reacción hemolítica transfusional.

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3. ¿Cuáles son las complicaciones que se pueden presentar en una transfusión
sanguínea?

La gran mayoría de las complicaciones graves, que tienen muy altas tasas de
mortalidad, son:

-Reacción hemolítica aguda (RTHA) debida a incompatibilidad ABO

-Enfermedad de injerto contra huésped (EICH)

-Sobrecarga circulatoria asociada a la transfusión

-Lesión pulmonar aguda relacionada con la transfusión (LPART)

Otras complicaciones incluyen:

-Reacciones alérgicas

-Alteración de la afinidad por el oxígeno

-Reacción transfusional hemolítica tardía

-Infecciones

-Púrpura postransfusional

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 PRACTICA Nº 09 y 10
SHOCK ANAFILÁCTICO: Etapa de sensibilización y etapa de
desencadenamiento

I.- INTRODUCCION:

La liberación secuencial de los mediadores liberados por la célula cebada

determinan las fases inmediata (a) y tardía (b) de la reacción anafiláctica. La fase
inmediata es responsabilidad de la histamina y otros mediadores preformados
tales como heparina, proteasas, factor quimiotáctico para eosinófilos (ECF) y
factor activador de plaquetas (PAF). Sus principales efectos son la vasodilatación,
aumento de la permeabilidad y contracción del músculo liso. La histamina es el
mediador de mayor importancia en esta fase. Existen tres receptores para
histamina en la membrana de las células blanco: H1, H2 y H3. La histamina al
actuar directamente sobre receptores H1 produce los siguientes efectos:
contracción muscular, aumento de la permeabilidad vascular, prurito, estimulación
de receptores sensoriales, generación de prostaglandinas y aumento del cGMP.
También inicia reacciones parasimpáticas reflejas mediadas por el vago y la
descarga de neuropéptidos.
La estimulación de receptores H2 produce secreción de ácido en la mucosa
gástrica, aumento de cAMP, inhibición de la liberación de histamina en basófilos,
inhibición de la liberación de linfoquinas y de enzimas lisosómicas y reducción de
la citotoxicidad mediada por células T.
La estimulación de receptores H3 determina inhibición de la síntesis de histamina
y reducción en la liberación de neuropéptidos. Finalmente, la estimulación
simultánea de receptores H1 y H2 conduce a vasodilatación, hipotensión, rubor y
cefalea. Las características del cuadro clínico observado en el paciente dependen
del balance de la estimulación de estos tres tipos de receptores.
Posteriormente, 4 a 48 horas después del contacto con el alergeno se inicia la
fase tardía en la que existe una gran afluencia de células inflamatorias,
especialmente PMN eosinófilos, neutrófilos y basófilos y depósitos de fibrina. La

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fase tardía surge después de la síntesis y liberación de mediadores derivados del
ácido araquidónico especialmente prostaglandinas (PGs) y leucotrienos LT C4, D4
y E4 (antes denominados Sustancia de Reacción Lenta de la Anafilaxia). Las
prostaglandinas tienen acciones antagónicas dependiendo de su estructura. Así
por ejemplo, las prostaglandinas PGF2Ó, PGD2 y PGG2 y el tromboxano A2
producen obstrucción bronquial en cambio las PGE2 y PGI2 son
broncodilatadoras. Los leucotrienos son importantes por su responsabilidad en la
mantención del broncoespasmo.
En la fase tardía intervienen también citoquinas sintetizadas por linfocitos y
macrófagos (c) que determinan la secuencia en la afluencia de las células
inflamatorias a la zona. Las más importantes son el Factor de Necrosis Tumoral-
alfa (TNF-Ó), las interleuquinas IL-1, IL-4, IL-5 e IL-6 y varios factores
estimuladores de colonias (CSF). El TNF-alfa es liberado muy precozmente y en
conjunto con las interleuquinas tiene además un papel importante en la regulación
de la síntesis de IgE. Los CSF actúan a nivel de médula ósea estimulando la
hematopoyesis, que aporta células inflamatorias al proceso.
En pacientes continuamente expuestos al alergeno suele producirse además una
fase crónica de prolongada duración (1-2 días) que se caracteriza por infiltración
de macrófagos, fibroblastos y basófilos y por destrucción tisular. La fase crónica se
caracteriza por la infiltración del tejido afectado por diversas células sanguíneas
(basófilos, eosinófilos, linfocitos T y monocitos) que son atraídas al lugar por
células cebadas activadas.
Entre los factores que influyen en las características del cuadro clínico provocado
por este mecanismo de daño se cuentan, la vía de ingreso del antígeno, el sistema
nervioso autónomo, la cantidad de células cebadas del tejido afectado y su
fenotipo y la sensibilidad de los tejidos a la acción de mediadores.
Los órganos y sistemas más afectados son la piel, vías respiratorias y tracto
digestivo.
En la piel, la reacción temprana se caracteriza por eritema, edema y urticaria y la
reacción tardía se expresa como induración con un infiltrado de células
inflamatorias. En las vías aéreas se observa una abundante secreción serosa a

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nivel nasal en la rinitis alérgica y un aumento de la secreción de mucus,
inflamación y broncoespasmos en el asma bronquial alérgico. En el sistema
digestivo la reacción anafiláctica se manifiesta como aumento del peristaltismo,
edema, diarrea, vómitos y fiebre. Las manifestaciones sistémicas de este cuadro,
observadas en el shock anafiláctico son vasodilatación y exudación en la
microcirculación de todo el organismo. Se produce en consecuencia un shock
hipovolémico, y si no se trata oportunamente, puede conducir a la muerte.
Las características de las fases descritas se reflejan en el cuadro clínico que
presenta el paciente. Así, el mecanismo de daño tipo I comprende una etapa
asintomática y una etapa sintomática. Esta última puede presentar tres fases
diferentes en cuanto al tiempo de aparición y a sus características, las fases
inmediata, tardía y crónica.
La etapa asintomática o de sensibilización se produce a raíz del encuentro del
alergeno con las células que normalmente participan en la inducción de la
respuesta inmune, esto es, células presentadoras de antígeno (CPA), linfocitos T y
linfocitos B. Al ser los alergenos de naturaleza fundamentalmente protéica, la
respuesta que evocan es T dependiente.
Esta etapa presenta algunas características particulares dependiendo de la
naturaleza del alergeno y de su vía de ingreso al organismo. Cuando ella ocurre
en mucosas (respiratoria o gastrointestinal) o en piel, la sensibilización puede
producirse in situ o en ganglios linfáticos cercanos. Si ingresa por vía parenteral, la
sensibilización puede ocurrir en el bazo o ganglios linfáticos. En cualquier caso, el
antígeno es reconocido directamente por linfocitos B y por linfocitos TCD4+
cooperadores luego de ser captado y procesado por macrófagos que le presentan
sus determinantes antigénicos. Se origina una respuesta humoral con predominio
de células plasmáticas productoras de IgE. Este hecho caracteriza a la reacción
anafiláctica, ya que en condiciones normales, las inmunoglobulinas que
predominan en la respuesta humoral primaria son la IgM y la IgG.
La inmunoglobulina E, debido a su propiedad homocitotrópica, se une a receptores
de membrana para su fragmento Fc ubicados principalmente en células cebadas y
basófilos, persistiendo en la superficie de estas células por largo tiempo. Se

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supone que una vez iniciada la producción de IgE, ella continúa por meses y aún
años, perpetuando la ocupación de receptores en células cebadas y basófilos.
Así, aún cuando el individuo no ha presentado ningún síntoma, ha quedado
sensibilizado al alergeno que provocó la respuesta inmune.
La etapa sintomática se inicia debido a un nuevo contacto con el alergeno que
sensibilizó al individuo. Sus características e intensidad dependen en parte de la
cantidad y ubicación anatómica de las células cebadas y basófilos con IgE en su
superficie.
La estimulación de las células cebadas por el alergeno gatilla la liberación de
prostaglandinas, leucotrienos, PAF y probablemente otras citoquinas que penetran
en la microcirculación local aumentando la expresión de moléculas de adhesión
celular en leucocitos circulantes y en células endoteliales. Los leucocitos se
adhieren a la pared del vaso y salen por diapédesis al tejido circundante.
La acción de citoquinas controla la migración y sobrevida de los leucocitos. Así,
las IL-3 y 5 secretadas por linfocitos T y el GM-CSF facilitan la migración de
eosinófilos y basófilos y aumentan su sobrevida. Las células de este infiltrado
exacerban los síntomas tempranos y producen daño tisular. Por ejemplo, los
basófilos liberan histamina y mediadores derivados del ácido araquidónico y los
eosinófilos secretan proteínas tóxicas tales como la proteína básica mayor. Las
células cebadas y leucocitos liberan radicales derivados del oxígeno tales como
anión superóxido, hidroxilo y peróxido de hidrógeno que participan en el daño
tisular.
La presencia de estas células, especialmente de los eosinófilos tienen valor
diagnóstico en relación a afecciones de origen alérgico ya que no son abundantes
en inflamaciones de otro origen salvo en las parasitarias. Además, las células
cebadas y basófilos activados por el alergeno y bajo la influencia del linfocito
CD4+ sintetizan y secretan citoquinas, las cuales son importantes en la
mantención de la respuesta anafiláctica. Así, la célula cebada secreta IL-4, IL-5 e
IL-6 las que aumentan aún más la síntesis de IgE. También liberan IL-4, factor de
necrosis tumoral-alfa y GM-CSF que estimulan, en médula ósea, la proliferación y
diferenciación de células cebadas y granulocitos.

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OBJETIVO:
Demostrar la etapa de sensibilización en el shock anafiláctico.
Demostrar la etapa de desencadenamiento en el shock anafiláctico.

II.- MATERIAL:

03 Oryctolagus cuniculus “Conejo”

03 Cavia porcellus “cuy”
06 Jeringas 5ml
Agua destilada
SSF estéril 100ml
Solución de histamina al 1 y 5 % o
Ampollas de clorfenamina 10 mg x 1ml
Alcohol yodado o alcohol de 70º
Ovoalbúmina (uso vía intraperitonial)

III.- PROCEDIMIENTO:
1.- Efecto de la histamina (al 5%) vía inhalatoria:
Colocar una torunda embebida con histamina al 5 % en sus fosas nasales del cuy
o conejo durante 5 a 10 min. Luego observar la reacción del animal y explicar.
2.- Efecto de la histamina (al 1%) vía intradérmica:
Administrar lentamente 0.5 ml de histamina al 1 % en la extremidad inferior del cuy
o conejo. Luego observar la reacción del animal y explicar.
Si se observan signos y/o síntomas, administrar intraperitoneal clorfenamina.
Explicar porque el uso.

IV.- RESULTADOS:

Los síntomas tienden a ser más graves en las reacciones anafilácticas alérgicas.
Aunque pueden observarse reacciones anafilácticas alérgicas grado I y II, l
mayoría de las reacciones anafilácticas alérgicas so grado II (23%) o III (60%),
mientras que la mayorí de las reacciones anafilácticas no alérgicas son grad I
(55%) o II (30%)[70]. Del mismo modo, los signo cutáneos son más frecuentes en
las reacciones n alérgicas, mientras que el colapso cardiovascular y el

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broncoespasmo son más frecuentes en las reaccione alérgicas. Hay anafilaxias
alérgicas grado I, pero n hay anafilaxias no alérgicas grado IV.
La combinación de un antihistamínico H1 y H2 no es superior a un antihistamínico
H1 solo para prevenir los efectos periféricos de la histamina, por lo queel uso de
famotidina en forma concomitante actualmente no se justifica.

V.- CONCLUSIONES:

La anafilaxia es un trastorno multisistémico que produce signos y síntomas

clínicos centrados en la piel, los sistemas respiratorio, cardiovascular,
gastrointestinal y nervioso central. La historia médica del paciente puede
influenciar la naturaleza y severidad del cuadro clínico. Los pacientes asmáticos
son más propensos al broncoespasmo, mientras que aquellos
con enfermedades cardíacas preexistentes o que están en tratamiento con
bloqueadores beta adrenérgicos, desarrollan con mayor frecuencia hipotensión
severa y shock. Se han propuesto varios sistemas de clasificación para evaluar la
gravedad de los signos y síntomas de la anafilaxia. El más antiguo es propuesto
por Ring y Messmer y sigue siendo una buena escala para
decidir el tratamiento:
- Grado I: Signos cutaneomucosos generalizados; eritema, urticaria con o sin
edema angiogénico.
- Grado II: Daño multivisceral moderado, con signos cutaneomucosos, hipotensión
y taquicardia moderada, hiperactividad bronquial (tos, disnea).
- Grado III: Daño multivisceral grave, con riesgo vital, que impone una terapia
específica agresiva (taquicardia o bradicardia, arritmias, broncoespasmo, colapso
cardiovascular con shock distributivo). Es el típico cuadro de shock anafiláctico.
Los signos cutáneos pueden estar ausentes o aparecer sólo después de la
recuperación de la presión arterial.
- Grado IV: Colapso cardiocirculatorio. Paro cardiorrespiratorio.
Esta escala ha sufrido múltiples modificaciones en
Europa, incluyendo una muy similar propuesta por la SFAR (Société Française
d’Anesthésie et de Réanimation). El NAP6 utilizó un sistema de clasificación de
gravedad de cinco grados, en que los casos fatales se separaron en un nuevo
grado V, presumiblemente para resaltar este grupo y permitir un escrutinio más
detallado de estos casos

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 PRACTICA Nº 11
Antígenos microbianos: agentes biológicos

I.- INTRODUCCION:

ANTÍGENOS FEBRILES: Agente de diagnóstico

SIGNIFICADO CLÍNICO

La infección causada por microorganismos de diversas especies produce entre

otros síntomas una marcada elevación de la temperatura, tal es el caso de la
fiebre tifoidea causada por Salmonella typhi, S. enteritis, así como las
paratifoideas causadas por S. paratyphi A y B, y el tifo causado por el género
Rickettsias. La infección por estos microorganismos induce a una respuesta
inmune de tipo humoral con la producción de anticuerpos que pueden ser
detectados con el antígeno específico.

Debido a la dificultad existente para el aislamiento de las Rickettsia sp, el

antígeno empleado para la determinación de anticuerpos es el de Proteus OX-19,
el cual presenta una reacción cruzada con bacterias del genero Rickettsia.

La reacción de Huddleson es un método serológico que detecta anticuerpos

contra B. abortus, B. melitensis y B. Suis, agentes causales de la brucelosis;
también conocida como fiebre de malta o fiebre ondulante por el cuadro febril
característico que se presenta.
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FUNDAMENTO
La prueba se basa en una reacción inmunológica entre los anticuerpos séricos
y el antígeno correspondiente produciendo una reacción de aglutinación
macroscópica.
II.- MATERIALES:
 Tífico “O” - Salmonella typhi; Antígeno somático, pH: 6.5  1.0
 Tífico “H” - Salmonella typhi; Antígeno flagelar, pH: 6.5  1.0
 Paratífico “A” - pH: 6.5  1.0
 Paratífico “B” - pH: 6.5  1.0
 Proteus OX-19 - pH: 6.5  1.0
 Brucella abortus - pH: 6.5  1.0
Suero control negativo:
Suero de conejo el cual no ha sido inmunizado contra ningún antígeno, por lo
que no muestra ninguna aglutinación con los antígenos en suspensión.
Suero Control Positivo:
Suero de conejo el cual ha sido inmunizado contra todos los antígenos febriles en
una suspensión.
• Pipetas serológicas
• Placa de Reacción
• Agitador

III.- PROCEDIMIENTO:
RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Obtenga sangre venosa y separe el suero evitando la hemólisis.
MÉTODO DE PRUEBA RÁPIDA EN PLACA
Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antígeno que se esté
usando.
NOTA: El reactivo así como los sueros, deben alcanzar la temperatura ambiente para
comenzar la prueba.
1. Depositar en sitios diferentes de la placa las siguientes cantidades del suero

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a analizar: 0.08 mL, 0.04 mL, 0.02 mL, 0.01 mL y 0.005 mL (EL SUERO
DEBE ESTAR TOTALMENTE CLARO).
2. Agitar el antígeno a utilizar para tener una suspensión uniforme.
3. Añadir 30 L de la suspensión de antígeno a cada una de las diferentes
cantidades de suero. Se recomienda utilizar pipetas automáticas (el gotero
incluido proporciona una gota de 30-40 L).
4. Mezclar el antígeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada
una de las cantidades de suero.
5. Girar la placa manualmente o utilizando un agitador mecánico (120 rpm)
durante 2 minutos.
6. Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la
aglutinación macroscópica.
7. Se recomienda incluir controles Positivo y Negativo.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
El grado de aglutinación se registra como sigue:
4+ Aglutinación del 100% de los organismos
3+ Aglutinación del 75% de los organismos
2+ Aglutinación del 50% de los organismos
1+ Aglutinación del 25% de los organismos
- Aglutinación del 0% de los organismos

El titulo del suero será la inversa de la dilución más alta en donde se observa
una aglutinación del 50% de microorganismos (2+).
Las diluciones del suero en la prueba en placa son aproximadamente
equivalentes a las diluciones para prueba en tubo como se muestra a
continuación. VOLUMEN DEL SUERO TITULO
0.08 mL 1 : 20
0.04 mL 1 : 40
0.02 mL 1 : 80
0.01 mL 1 : 160
0.005 mL 1 : 320

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MÉTODO DE TITULACIÓN EN TUBO:
Mezcle bien la suspensión de antígeno mediante agitación suave; prepare una
dilución 1:20 del antígeno a utilizar en solución salina.
1. Colocar 7 tubos de 13 x 100 mm en una gradilla para cada antígeno a
probar, marcándolos del 1 al 6 y el tubo 7 como control.

2. Añadir al tubo 1, 0.9 mL de solución salina y 0.5 mL a los 6 tubos restantes.

3. Añadir 0.1 mL del suero a probar al tubo número 1, mezcle bien y transfiera 0.5
mL al tubo número 2.
4. Continúe esta operación hasta el tubo número 6, eliminar 0.5 mL de esta dilución.
El tubo 7 (Control negativo) tendrá únicamente solución salina.
5. Añadir 0.5 mL del antígeno diluido 1:20 a cada uno de los 7 tubos.
6. Agitar bien la gradilla para mezclar el antígeno y el suero e incubar en baño
de agua. El tiempo y temperatura recomendado es el siguiente.
Antígeno Temperatura Tiempo de incubación
Tífico “O” 48-50ºC 18-24 Horas
Tífico “H” 37ºC 2 Horas
S. paratyphi “A” y “B” 48-50ºC 2 Horas
Brucella abortus 37°C 48 Horas
Proteus OX-19 37ºC 18-24 Horas

7. Después de la incubación, saque la gradilla que contiene los tubos del baño y
observe la aglutinación. La utilización de una fuente de luz directa contra un fondo
negro dará mejores condiciones para la lectura.
8. Registrar los resultados como sigue:
4+ Todos los organismos 100% aparecen sedimentados en el fondo del tubo
y el sobrenadante es totalmente claro.
3+ Aproximadamente el 75% de los organismos se encuentran sedimentados
y el sobrenadante es ligeramente turbio.
2+ Aproximadamente el 50% de los organismos se encuentran sedimentados
y el sobrenadante es moderadamente turbio.
M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 49
 1+ Aproximadamente el 25% de los organismos se encuentran sedimentados
y el sobrenadante es turbio.
Negativo No se observa aglutinación y la suspensión es turbia.

9. Registrar el título del suero en el cual la ultima dilución de una aglutinación

sea 2+.
PRECAUCIONES

1. Todos los sueros por probar deberán estar totalmente claros y libres de
contaminación bacteriana.
2. No caliente el suero antes de probarlo.

3. Agite bien el antígeno antes de utilizarlo para asegurar una suspensión

uniforme.
4. El antígeno se debe mantener en refrigeración a 2-8ºC cuando no se utilice.
5. No congelar.
Se recomienda la utilización de sueros control Positivo y Negativo probados en paralelo con
la muestra de suero para asegurar al analista que el antígeno bacteriano en uso es capaz de
reaccionar con su anticuerpo homólogo y mostrar cómo serán los resultados esperados en
muestras de suero positivas y negativas.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

1. Algunos sueros normales pueden dar un titulo de 1:20 a 1:40 y hasta 1:80
pero esto puede ser debido a vacunaciones o alguna infección anterior. No
siempre se presenta producción de aglutininas en infecciones bacterianas.
2. Se pueden producir reacciones cruzadas de aglutininas debido a
vacunaciones para ciertas enfermedades. La vacuna tífica puede producir
aglutininas contra antígenos Proteus.
3. En la reacción de Huddleson, títulos de 1:80 pueden considerarse ya de
significado clínico.
Nota: El diagnóstico exacto de la enfermedad depende del acercamiento entre el laboratorio
clínico y el médico, ya quela elevación del título en la muestra de suero con
sintomatología reciente y la muestra de suero en fase convaleciente indicará la exactitud
del diagnóstico.

IV.- RESULTADOS:

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 50
V.- CONCLUSIONES:

Generalmente títulos de 1:40 ó 1:80 son sospechosos de enfermedad. Sólo títulos

mayores de 1:80 pueden considerarse probatorios de diagnóstico de enfermedad
cuando estén acompañados de la sintomatología clínica. Títulos mayores de
1:320, son concluyentes.

El suero del paciente se pone en contacto con antígenos específicos. En este caso
se utilizan suspensiones de Salmonellas o Brucellas muertos. Si la muestra
contiene los anticuerpos correspondientes se producirá una aglutinación visible
macroscópicamente.

Las Salmonellas se consideran patógenos entéricos obligados. Los alimentos y el

agua contaminados son los mecanismos de transmisión. La enfermedad puede
presentarse como gastroenteritis, septicemia con lesiones en diversos
órganos o fiebre tifoidea.
La Brucelosis se presenta en la mayoría de los casos con anorexia, fiebre,
decaimiento y escalofríos, pudiendo aparecer luego complicaciones importantes
como son las óseas y neuropsíquicas.

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 51
 PRACTICA Nº 12
Vacunas y sueros

I.- INTRODUCCION:

VACUNA: Es una suspensión de microorganismos (virus, bacteria vivos,

atenuados o muertos) que se inocula a intervalo regulares en una zona
determinada de nuestro cuerpo con el objetivo de generar una respuesta inmune
duradera y eficaz. Es un método preventivo no curativo. Si bien la duración de la
inmunidad es menor que cuando sufrimos la enfermedad especifica, ha sido y es
el método más eficaz para prevenir o erradicar enfermedades en el mundo.
Ej.1: La viruela erradicada del mundo hace 20 años (La vacuna que la
prevenía era la antivariólica).
Ej.2: La Poliomielitis o Parálisis infantil (vacuna Sabín o Salk) ha sido radicada
de latino América.
Una vez aplicada, la vacuna provoca que nuestro cuerpo comience a preparar
defensas contra los pequeñísimos organismos que producen la enfermedad. Es
decir, el organismo se defiende de la enfermedad.
El procedimiento provoca en el individuo una enfermedad atenuada, creando así
los anticuerpos específicos. Es decir, se inoculan al individuo gérmenes cuya
actividad ha sido atenuada por diversos métodos: desecación, acción de
sustancias químicas, o por sucesivos pases, a través de distintos animales. La
vacuna de la rabia es una suspensión salina de virus atenuados. La vacuna Salk,
contra la poliomielitis, tiene virus muertos y la vacuna Sabín contiene virus
atenuados.
SUERO: Es una suspensión de anticuerpos específicos previamente formado por
otro individuo (humano o animal) que actúan rápidamente neutralizando los
efectos de una enfermedad. Ej. Suero antitetánico. Suero antirrábico.
Son anticuerpos que se llaman Gama Globulina.

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 52
El suero terapia consiste en inyectar al enfermo un suero sanguíneo de individuos
o animales que ha padecido la enfermedad y que contiene gran cantidad de
anticuerpos.
Pasos para obtener un suero:
Ejemplo:
1- Se inocula al caballo el germen patógeno.
2- Se extrae sangre.
3- Se separa el suero con los anticuerpos.
4- Se inocula suero a la persona enferma.
5- Persona curada.
En este caso la inmunidad es pasajera, pero su rápida acción contra resta los
efectos de la enfermedad. En el caso del suero antidiftérico y del antitetánico y de
los sueros antiofídicos.
En síntesis:
La vacuna posee tres propiedades esenciales y eficaces:
• Provoca una inmunidad activa y duradera.
• Previene la infección.
• Es específica.
La sueroterapia se caracteriza por:
• Provocar una inmunidad pasiva y de corta duración.
• Atacar la infección (especialmente se aplica en épocas de epidemias o de
enfermedades declaradas).
• Es específica.
En casos, de enfermedad declarada (epidemias) se asocia la vacunación y la
sueroterapia (Cero - Vacunación). La inmunidad activa producida por la vacuna
tarda algunos días en aparecer, en este período se protege con la inmunidad
pasiva que confiere el suero. De esta manera, el enfermo está constantemente
protegido y en las mejores condiciones para superar la enfermedad.

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 53
VACUNA. Suspensión de microorganismos vivos atenuados, inactivados o sus
fracciones, que son aplicados a individuos con el objeto enfermedad infecciosa
correspondiente.
TOXOIDE. Toxina que ha sido tratada con productos químicos o calor, a fin de
perder su efecto tóxico, pero que conserva su inmunogenicidad.
SUEROS. Productos de origen animal derivados de la sangre de caballo u otras
especies.
ANTITOXINA. Anticuerpos capaces de neutralizar la acción tóxica de un antígeno.
INMUNOGLOBULINA. Globulina plasmática que actúa como anticuerpo.

América del Sur (Venezuela, Colombia, Perú, Bolivia, Paraguay, Brasil, Guyana,
Suriname, Guyana Francesa)
• Hepatitis A
• Antimeningocócica B, C
• Fiebre Amarilla.
• Fiebre Tifoidea
• Rabia: grupos de riesgo expuestos a mordeduras de animales salvajes o
domésticos.

PLAN DE INMUNIZACIÓN PERU

Perú
Seleccione el país

Vacuna(s) Edad Dosis

BCG Recién nacido Primera dosis
DTP 2 meses Primera dosis
DTP 3 meses Segunda dosis
DTP 4 meses Tercera dosis
FA 12 meses Primera dosis
FA Población en Riesgo Reactivación
HB Recién nacido Primera dosis
HB 2 meses Segunda dosis
HB 4 meses Tercera dosis
HB Población en Riesgo Repetir ciclo de vacunación

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 54
 Hib 2 meses Primera dosis
Hib 3 meses Segunda dosis
Hib 4 meses Tercera dosis
SRP 12 meses Primera dosis
Td MEF Reactivación
VPO 2 meses Primera dosis
VPO 3 meses Segunda dosis
VPO 4 meses Tercera dosis

BCG Vacuna Antituberculosa

DTP Vacunas contra difteria, tétanos y tos ferina
FA Vacuna Antiamarílica
HB Vacunas contra la hepatitis B (HB)
Hib Vacunas Haemophilus influenzae tipo b
SRP Vacunas contra el sarampión, rubéola y parotiditis
Td Vacunas contra difteria, tétanos (VACUNA ADULTO )
VPO Vacuna de polio atenuada

ACTIVIDAD 12
O suero o vacuna.

A una persona se le inyecta cierta sustancia y tiene los efectos que se indican
a continuación. Para cada caso señala si lo que se ha inyectado es un suero,
una vacuna, o ninguna de las dos cosas.

a) Le provoca fiebre y en su sangre Vacuna

aparecen anticuerpos al cabo de unos
días.
b) En su sangre aparecen anticuerpos Suero
inmediatamente y se muere la bacteria.
c) Después de la inyección, no vuelve a Vacuna
padecer nunca más la enfermedad.
d) Tiene intensa sensación de frío ninguna de las dos cosas
alternando con calor y picores en los
ojos.

-Vacuna
-Suero
-Ninguna de las 2 cosas

OBJETIVO:

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Identificar los tipos de vacunas y sueros que se expenden en las farmacias a
nivel local; comparando su composición y efecto.

el suero es la ‘parte de la sangre o de la linfa que permanece líquida después de

haberse producido la coagulación’. También aclara en suero medicinal que puede
ser una ‘disolución de sales u otras sustancias en agua, que se inyecta con fines
curativos’, pero este sentido no es aplicable a este caso porque los fines de las
vacunas son preventivos, y no curativos.
Las vacunas, en cambio, son preparados que constan de antígenos o de otros
productos biológicos; el organismo del ser humano o animal que recibe la vacuna
tiene un papel activo en el desarrollo de la respuesta inmunitaria inducida por la
vacuna.
La inmunidad artificial pasiva consiste en la introducción en el organismo de
anticuerpos sintetizados previamente por otro individuo. La sueroterapia consiste
en introducir el antígeno correspondiente a un animal (normalmente se utilizaba el
caballo), que sintetiza los anticuerpos contra una enfermedad determinada.
La inmunidad artificial activa se consigue con la vacunación, que consiste en
introducir gérmenes muertos o atenuados, incapaces de desarrollar la
enfermedad, pero que son portadores de los antígenos específicos.

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 PRACTICA Nº 13
TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO PARA VIH: ELISA y test rápidos.

I.- INTRODUCCION:

Los virus de inmunodeficiencia humana (HIV-1, HIV-2) causante del SIDA, son
transmitidos principalmente por contacto sexual o a través de la sangre o
productos contaminados derivados de la sangre. En individuos infectados con
estos virus aparecen anticuerpos, como respuesta del sistema inmunitario o la
invasión viral. Estos anticuerpos no son protectores y no contienen inmunidad,
pero por ser marcadores tempranos de la infección, su detección constituye la
base del estudio de la patología.

El análisis inmunoabsorbente ligado a Enzimas (ELISA), se ha aplicado

frecuentemente a problemas de diagnostico clínico. Se han desarrollado ELISAs
tanto directos como indirectos. Recordemos que los métodos de ELISA directos
emplean anticuerpos conjugados a enzimas, con frecuencia se trata de
anticuerpos monoclonales, para detectar el antígeno en un espécimen del
paciente, en tanto que los métodos ELISA indirectos emplean anticuerpos
conjugados a enzimas para reconocer anticuerpos del suero de un paciente, que
se fijan a un antígeno especifico. En todo caso, la alta especificidad, extrema
sensibilidad y bajo costo de las pruebas de ELISAs los hacen herramientas
excelentes para el diagnostico clínico.

La prueba de ELISA para SIDA es una ELISA indirecto, diseñado para medir los
anticuerpos que hubiera en el suero contra el virus VIH. Aun cuando el SIDA es
una enfermedad que utiliza gravemente el sistema inmunológico del organismo, la
infección inicial con VIH provoca la producción de anticuerpos contra varios
antígenos de VIH, en particular los de la envoltura del VIH. Estos anticuerpos se
pueden detectar por la prueba ELISA para SIDA.

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 57
Las pruebas ELISA son extremadamente sensibles y se pueden automatizar,
permitiendo así su empleo como procedimientos rutinarios de diagnostico. La
prueba ELISA para el virus causante de SIDA se ha usado para examinar la
sangre en los bancos de sangre y evitar así el uso de sangre contaminada en las
transfusiones.
PRINCIPLE
AIDS (ACQUIRED IMMUNODEFICIENCY SYNDROME)
Is characterized by changes in the population of T cell lymphocytes. In the infected
individual the virus causes a depletion of a subpopulation of T cells. Called T helper
cells, which leaves these patients susceptible to opportunistic infections and some
malignancies.
The presence of the virus in the patient causes the immune system to elicit the
production of anti-HIV-1 or HIV -2 antibodies. Tests to detect these anti-HIV-1 or HIV -
2 antibodies are now widely used in order to identify infected patients and for the
screening of blood derived products.
The synthetic peptides gp-41 derived from HIV -1 and transmembrane glycoprotein
and gp-36 derived from HIV -2 represents a major antigenic site for anti-HIV
antibodies. A fragment of this protein has been produced in the laboratory with the
help of advanced genetic engineering technologies.

RED-DOT HIV-1 & 2™ is a rapid membrane-based immunodiagnostic assay for

detection of HIV -1 & 2 antibodies. The assay utilizes a HIV peptide antigen (HIV -
1/HIV -2) on the membrane surface which “captures” antibodies in the serum that are
against HIV -1/HIV -2. Captured antibodies are visualized with a Protein A colloidal
gold conjugate resulting in a red dot.
Absence of antibodies in the serum is indicated by a clean white membrane.

The specimen is allowed to pass through the membrane immobilized with HIV
peptide antigens. HIV -1 & 2 antibodies in the positive specimen will be bound to the
antigens immobilized on the membrane. Protein-A gold will then be added to bind
the conjugate portion of the HIV antibodies so as to give a distinct red dot on the

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 58
membrane.
The test kit represents the second generation of modern HIV antibodies testing. First
generation assays use HIV antigen that is purified from cells which have been
infected with the virus. The present assay uses a viral protein as antigen which has
been produced in t he laboratory with the help of advanced genetic engineering
technologies. The material used in this test is not isolated from the virus for the
envelop protein.
THIS MATERIAL IS THEREFORE 100% NONINFECTIOUS and highly specific.
This product is a SCREEN TEST for HIV antibodies. All positive tests must be
confirmed with a second test (western Blot or Immunofluorescent test)

II.- MATERIAL:
REAGENTS
1. Serum Buffer.
2. Gold Conjugate.
3. Wash Buffer.
4. Reaction Cell (Test Device).
STORAGE INSTRUCTIONS
1. Do not smoke or eat or drink or pipet by mouth in the laboratory,
2. Wear disposable gloves whenever handling patient’s specimens.
3. Use a 5% Sodium Hypochlorite solution to wipe up spills.
4. Treat all materials used in the test as if they were infectious. Autoclave all
materials for 1 hour at 121.5 degree Celsius. Add Sodium Hypochlorite to
liquid waste in order to reach a final concentration of 1%.
5. Use a separate pipette for each sample and then discard it as a bio-
hazardous waste.
6. Once the assay has been started, all subsequent steps should
be completed without interruption and within the recommended time
limits.
SPECIMENS COLLECTION
1. Specimen can be drawn by venipuncture or convenient fingertip method.

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 59
 After complete clot reaction, the serum is separated for testing.
2. The serum specimens should be stored refrigerated. If testing is to be
prolonged in excess of 24 hours, serum should be frozen. Bacterial
contamination may cause protein to denature.
3. Serum specimens should be tested within six hours after collection, if
kept at room temperature. If the testing is delayed, the specimens
should be refrigerated (2° to 8°C) or kept frozen (for longer storage). Serum
may be refrigerated for up to 24 hours.
4. When frozen specimens are thawed, they must be mixed thoroughly
and excessive sediment removed by centrifugation before use.
5. If specimens are to be mailed, add 0.01% thimerosal (m/v) to the serum
specimens and dispatch by the fastest means available.
6. If fresh blood specimens are to be used, make certain that anti-coagulant is
added.
III.- PROCEDIMIENTO:

TEST PROCEDURE
A. PREPARATION FOR HIV TESTING
1. Prepare a data sheet to identify the individual pack for each specimen.
2. Bring all reagents to room temperature before use.
3. Open a pouch to obtain the test device when ready to test a specimen.
When adding solutions to the device, be sure to allow solutions to soak in before
proceeding to the next step. Solutions and sample (serum) should be added to the
inner circle of the device. Refer to the diagram.

B. QUALITATIVE TESTING FOR SERUM SAMPLES.

1. Add 2 drops of Buffer into the device.
2. Add 1 drop of Serum specimen using a disposable pipette provided in
each pouch.
3. Add 2 drops of Buffer.
4. Add 2 drops of Wash Solution.
5. Add 2 drops of Gold Conjugate.
6. Add 2 drops of Wash Solution.
M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 60
 7. Read the result on the membrane within 2 minutes.

INTERPRETATION OF RESULTS
POSITIVE: If two red spots are visible (figure 1), the specimen contains
HIV -1 & 2 antibodies. The test dot may have any shape or oink/red and may
be different color intensity.

Figure 1

The positive procedural control is a spot of rabbit IgG that has been
immobilized onto the membrane surface. This control verifies that the test
reagents (colloidal gold conjugate, wash, buffer, and HIV -1& 2 devices) are
functioning and that the reagents were added in the correct order.
NEGATIVE: If only one red spot (control dot) is visible (Figure 2), the
specimen does not contain detectable HIV -1 & 2 antibodies. A slight pinkish
color may develop on the overall surface of the membrane that can be
considered as negative. Centrifugation of the serum specimen may help flow -
through of the specimen on the membrane and reduce the pinkish color. A
slight gray

test dot shall be considered as negative.

Figure 2
No positive or negative control serum is needed and therefore not included in
the two-dot test.
FROZEN SAMPLES
The HIV test is best used with fresh specimens that have not been frozen and
thawed. However, most frozen specimens will perform well if the suggested
procedure is followed.
M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 61
 1. Allow the specimen to thaw in a vertical position and do not shake the
specimen. This allows particulates to settle at the bottom. If a centrifuge is
available, the specimen can be centrifuged.
2. Insert the disposable pipette just below the surface of the specimen and
withdraw on drop of specimen.

PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Specimens which are negative in the HIV assay are considered negative and no
further testing is required. Positive specimens should be retested in order to
confirm the initial result. Specimens repeatedly reactive in the two assays are
considered to be positive for screening test.

This product is a SCREENING TEST for HIV -1 & 2 antibodies. All positive tests
must be confirmed with a second test (Western Blot or Immunofluorescent test).
RED-DOT HIV 1 & 2 shows 100% agreement with results obtained by the
use of other qualified immunological HIV tests.
120 serum specimens of known HIV serology were blindly evaluated using
the RED-DOT HIV 1 & 2™. Of these, 37 were ELISA and RED-DOT HIV
positive, and 83 were ELISA and RED- DOT HIV negative. Sensitivity: 100%.
Specificity: 100%

OBJETIVO:
Determinar el diagnóstico de VIH; utilizando la técnica de ELISA y test rápidos:

Se caracterizan por una alta sensibilidad, cercana al 100% (16,25), y una buena
especificidad (99,5%) que aún es superior a la de las pruebas rápidas e inferior a
la de las confirmatorias (9,25). La especificidad depende de la calidad del antígeno
que contiene la prueba, que es el componente que define su generación ,hoy sólo
son aceptables los ELISA de tercera y cuarta generación.

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 62
Otro aspecto a considerar es el mecanismo con el que los ELISA capturan los
anticuerpos, que los diferencia en diversos tipos, haciendo posible encontrar
pruebas de una misma generación con distintos mecanismos de acción. Los
principales mecanismos vigentes son: 1) indirecto: tiene alta sensibilidad pero una
menor especificidad, lo que puede ocasionar falsos reactivos. 2) competitivo: son
altamente específicos 3) sándwich: tienen una mejor sensibilidad, sus resultados
pueden ser más precoces y son altamente específicos y de captura: tienen buena
sensibilidad y una alta especificidad.

Inmunofluorescencia indirecta

Tiene una sensibilidad y especificidad similar al WB, incluso su positividad puede

ocurrir antes que el WB, es mucho más barata (de 10 a 11 veces menor), su
tiempo de ejecución es menor y la técnica más simple; por ello ha desplazado al
WB. constituyendo el 95% de las confirmaciones a nivel nacional.

IV.- RESULTADOS:

V.- CONCLUSIONES:

Desde el descubrimiento del VIH, la tecnología de las pruebas diagnósticas ha

evolucionado sustancialmente y en paralelo con los nuevos descubrimientos sobre la
patogénesis del VIH/SIDA, ello ha generado el flujo dinámico de estos ensayos, en el que
unos han sido dejados de lado, siendo actualmente reemplazados por aquellos que tienen
mejor performance.

Las pruebas rápidas no sólo han mejorado su sensibilidad y especificidad, sino que ahora
son capaces de hacer diagnósticos simultáneos con otras ITS y detectar antígenos del

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 63
VIH; eso podría significar, en el futuro relativamente cercano, el definitivo desplazamiento
de los ELISA.

Las pruebas rápidas permitieron llevar los exámenes fuera de los establecimientos de
salud y beneficiaron particularmente a las gestantes que carecían de un diagnóstico
expedito cerca o durante el trabajo de parto. Sin embargo, aún es necesario corroborar el
diagnóstico presuntivo con las pruebas de ELISA de tercera y cuarta generación, que para
convertirse en un diagnóstico definitivo requiere de las pruebas confirmatorias.

VI.- CUESTIONARIO:

1.- Describir las principales vías de infección del VIH:

La mayor parte de las personas que contraen el VIH, lo contraen a través de las
relaciones sexuales anales o vaginales, o al compartir agujas, jeringas u otros
implementos para la inyección de drogas (por ejemplo, los calentadores). Pero hay
herramientas poderosas que pueden ayudar a prevenir la transmisión del VIH

Las relaciones sexuales anales son el tipo de actividad sexual de mayor riesgo
para contraer o transmitir el VIH.
Ser el integrante receptivo de la pareja (bottom) es más riesgoso que ser el
insertivo (top).
Su riesgo de contraer el VIH es muy alto porque la mucosa que recubre el recto es
delgada y puede permitir la entrada del VIH al cuerpo durante las relaciones
sexuales anales.
El insertivo también tiene riesgo porque el VIH puede entrar al cuerpo por el
orificio que se encuentra en la punta del pene (uretra), por el prepucio (si el pene
no está circuncidado) o por pequeños cortes, rasguños o llagas abiertas en
cualquier parte del pene.
La mayoría de las mujeres que contraen el VIH, lo contraen a través de las
relaciones sexuales vaginales. El VIH puede entrar al cuerpo de la mujer durante
las relaciones sexuales vaginales a través de las membranas mucosas que
recubren la vagina y el cuello uterino.

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 64
2.- Principales características físicas químicas y estructurales de la partícula de
VIH:

El VIH es un retrovirus perteneciente a la subfamilia de los lentivirus. El estudio de

éstos, se ha visto notablemente incrementado después del descubrimiento del
VIH. Comparado con otros virus, los lentivirus tienen un genoma de Acido
Ribonucleico (ARN) más extenso, en torno a las 10 Kilobases (Kb). Su propiedad
más relevante estriba en la capacidad de codificar genes esenciales que permiten
la regulación de su propia expresión en la célula infectada.

Estructura.

El VIH consta de una bicapa lipídica externa, como envoltura, donde se han
encontrado diferentes proteínas membranales del huésped, además de
glicoproteínas virales asociadas en trímeros o tetrámeros. La glicoproteína de
superficie gp120 está unida de forma no covalente a la también glicoproteína
transmembranal gp41; estos oligómeros son fundamentales para la actividad
biológica del virión ya que aportan el sitio de interacción y fusión con las células
blanco, además de aumentar el tamaño del virus hasta en 10 nanómetros (nm)
siendo, por tanto, fácilmente identificables por microscopía electrónica. Las
partículas virales maduras miden entre los 100 y 130 nm de diámetro, mientras
que las inmaduras están entre los 120 y 140 nm

Por debajo de la envoltura, la proteína miristilada MA (p17) forma la matriz viral de

estructura icosaédrica. En el centro, se encuentra la cápside que asemeja a un
cono y está constituida por la proteína viral más abundante en la partícula, CA
(p24). A excepción de los desoxirribonucleótidos, dentro del cono se encuentra
todo el material necesario para armar el provirus: las proteínas virales PR (p15),
RT (p55 y p66), IN (p11), NC (p17), Ll (p6), más las dos cadenas idénticas de ARN
M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 65
y un par de iniciadores de ARN transferente (ARNtLys). El VIH, como cualquier
otro retrovirus, posee un genoma de ARN de cadena simple (ss) que depende de
una sola enzima, la retrotrancriptasa, para convertir su ARN genómico en ADN
(provirus) que es posteriormente integrado en el genoma celular. Este provirus
posee aproximadamente 9.8 Kb de longitud.

Al igual que el resto de retrovirus, en su genoma encontramos tres regiones

codificantes, gag, pol y env, que codifican las proteínas de la cápside (Gag), las
enzimas necesarias para la replicación (Pol) y la glicoproteína externa (Env),
responsable de la infectividad de la partícula viral a través de la unión a receptores
específicos de la célula. Las enzimas virales codificadas por pol son la
transcriptasa inversa (RT), la integrasa (IN) y la proteasa (PR). Como la mayoría
de los retrovirus, el VIH posee un promotor y un sitio de poliadenilación dentro de
la región larga terminal (LTR) y expresa un solo transcrito primario.

Las proteínas adicionales expresadas por el VIH son parte de la partícula viral (Vif,
Vpr, Vpx), regulan directamente la expresión génica viral (Tat, Rev) o interactúan
con la maquinaria celular para facilitar la propagación del virus (Vpu, Nef). Estas
proteínas adicionales incrementan la complejidad de la organización y expresión
del VIH. Se ha propuesto que los lentivirus deben incluirse en un subgrupo de los
retrovirus denominado retrovirus complejos. La característica distintiva de este
subgrupo es la habilidad para regular su propia expresión vía factores proteicos
codificados por el virus. Es esta propiedad la que permite a los virus que la
poseen, como el VIH, permanecer durante largos periodos en la célula infectada,
generando con ello infecciones crónicas activas.

3.- Esquematizar las fases de infección celular por VIH:

El ciclo vital del VIH sigue, en general, las pautas del resto de retrovirus Después de que
el virus alcanza la célula diana y logra penetrar a través de la membrana plasmática, la
RT convierte el ARN viral en ADN. El ADN retrotranscrito es transportado al núcleo e
integrado al ADN celular, proceso mediado por la enzima IN. Debido a las características
de replicación de los retrovirus, el ADN proviral está flanqueado por las regiones LTR
(long terminal repeats), con importantes funciones reguladoras.

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 66
 PRACTICA Nº 14
SUSTITUCIONES Y TRASPLANTES DE ÓRGANOS

I.- INTRODUCCION:

La sustitución de tejidos o de órganos que están ausentes o afectados

irreversiblemente por una enfermedad, es una idea muy antigua de la humanidad.
La leyenda dorada de Jacques de Voragine trasmitió el milagro de San Cosme y
San Damián que sustituyeron la pierna sarcomatosa de un sacristán cristiano por
la de un moro muerto poco antes, según se recoge en una pintura del museo del
Convento San Marco en Florencia.

La palabra injerto se ha convertido en sinónimo de reemplazo de un órgano, ésta

denominación no es puramente exacta para algunos que prefieren la palabra
trasplantación para designar el reemplazo de un tejido o de un órgano viviente.
La palabra trasplante se emplea en el sentido más amplio para denotar toda
extirpación o desprendimiento parcial de una parte de la economía del mismo
sujeto o de otro. Cuando un órgano es sustituido por otro órgano para que realice
la misma función del primero, le llamaremos “sustitución”, y un ejemplo clásico es
el reemplazo del esófago por otro órgano como sería el colon, estómago o
intestino delgado para que realice la función del primero.

No se incluye dentro del trasplante el uso de prótesis, materiales de síntesis ni

aditamentos artificiales que puedan ser fijados en la economía, no constituyendo
células o tejidos humanos o de animales.
Teniendo en cuenta las relaciones genéticas entre el donante y el receptor, existen
cuatro clases de trasplantes: a) autoinjerto: el donante y receptor son el mismo
sujeto; b) isoinjertos: donante y receptor son individuos genéticamente idénticos
de la misma especie (injertos entre gemelos homocigóticos). c) aloinjerto u
homoinjerto: donante y receptor son individuos genéticamente diferentes de la

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 67
misma especie y d) xenoinjerto o heteroinjerto: donante y receptor son
individuos de distintas especies.
Al explicar los aspectos genéticos e inmunológicos del trasplante, se utilizan los
prefijos auto, sin, alo y xeno para formar adjetivos (génico o inmune) y sustantivos
(Antígeno, anticuerpo, inmunidad, injerto y trasplante).
Según el sitio de la implantación, los trasplantes son ortotópicos, cuando se sitúan
en la misma parte de la economía después del trasplante que antes, de lo
contrario son heterotópicos.

Como ejemplo de trasplante ortotópico es el de córnea, injertos de piel que cubren

un defecto de la superficie corporal, el trasplante de corazón y pulmones y los
hepáticos en región subdiafragmática con conexiones vasculares normales. Entre
los heterotópicos tenemos los injertos subcutáneos o intramusculares de tejido
endocrino e injertos de hígado o riñón en porción inferior del abdomen o región
pélvica. La reimplantación de extremidades es ejemplo de autoinjerto ortotópico.

Teniendo en cuenta las técnicas de implantación los trasplantes se clasifican en

injertos anastomosados, en los cuales la circulación del receptor se establece en
el injerto al efectuar el mismo, por anastomosis vascular; injertos pediculados, en
el cual se concibe al sitio receptor valiéndose de un pedículo que posee vasos
sanguíneos, injertos libres que se trata de fragmentos aislados de tejido que

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 68
carecen de conexiones vasculares, nerviosas o linfáticas, aunque pueden tener la
variedad libres vascularizados, siendo aquellos que al terminar el procedimiento
de implantación se le reconstruyen sus conexiones vasculares, nerviosas o
linfáticas, como son actualmente los injertos de piel, músculo, hueso, etc.
mediante técnicas microquirúrgicas; e injertos transfundidos, aquel que se
establece valiéndose de inyección constante de una suspensión celular en
corriente circulatoria, cavidad corporal o tejidos del huésped, ejemplo de ello el
trasplante medular o sea, que se trasplanta por inyección intravenosa y las células
inyectadas pueblan los espacios medulares y el trasplante de células
pancreáticas.

Los trasplantes pueden también clasificarse con relación a la anatomía, la

histología y la citología del injerto, según si el injerto es de un donador embrionario
o maduro, si el receptor es inmunológicamente inmaduro (fetal temprano) o
maduro (postnatal y adulto), si el sitio es o no privilegiado, esto es, un sitio que
protege al injerto del rechazo como por ejemplo la cámara anterior del ojo y dentro
del cerebro; según si el injerto es de tejido neoplásico o no, según la técnica y la
duración de preservación y almacenamiento del injerto y si la finalidad es
terapéutica o experimental .El ser humano posee mecanismos para poder
sobrevivir en un ambiente hostil poblado de agentes potencialmente nocivos, en
forma de bacteria y virus, capaces de originar enfermedades si se produce una
invasión del huésped coronada por el éxito, es necesario que el individuo posea
medios de reconocer inmediatamente la presencia de una proteína extraña para
poderla rechazar con prontitud, mediante el proceso de la inmunidad.

El agente que estimula ese proceso se conoce como antígeno y el huésped

elabora otras proteínas que se oponen a la proteína extraña y que se conocen
como anticuerpos.
Por otra parte el anticuerpo con ayuda del complemento al que se une, precipita o
inactiva la proteína del antígeno. Los aloinjertos reciben por parte del receptor la
misma reacción que aplica el organismo a cualquier otro antígeno extraño. El

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 69
aloinjerto puede sobrevivir durante un período inicial de días o semanas, pero
después, según el tejido empleado y el sitio en que se trasplante, se necrosa y es
cambiado o reemplazado por tejido fibroso. Esta destrucción del aloinjerto viene a
ser consecuencia de la reacción inmunitaria que suele conocerse como rechazo,
de ahí que este fenómeno sea el más importante sobre el que circunda el
trasplante de órganos, siendo necesaria la utilización de diferentes medicamentos
inmunosupresores para frenar el rechazo, proceso que ha sido investigado a
través de los años y que su progreso ha permitido en el momento actual la
realización exitosa de trasplantes de numerosos órganos, como el corazón,
pulmón, hígado, páncreas y médula ósea, pasando de una etapa experimental a la
aplicación clínica sobre bases sólidas, sobre todo desde la introducción de la
Ciclosporina A, mejorando enormemente el manejo del rechazo.

Los xenoinjertos son destruidos del mismo modo que los aloinjertos, con la única
diferencia que el proceso suele ser de carácter mucho más rápido y fulminante, en
un período de tiempo menor, por lo que la aplicación de éstos en clínica sea
imposible en el momento actual.

CRITERIOS DE COMPATIBILIDAD INMUNITARIA

En el hombre existe un locus dominante productor de fuertes reacciones de
aloinjertos: se trata del sistema HL-A (antígeno leucocitario humano) que junto al
grupo ABO, conocido desde largo tiempo en los hematíes, constituyen los dos
únicos antígenos de histocompatibilidad identificados en el ser humano.
Dado que los antígenos HL-A abundan en los leucocitos humanos, en plaquetas,
fibroblastos y la mayoría de tejidos orgánicos pero faltan en los hematíes , siendo
detectados por aglutinación leucocitaria o mediante pruebas citotóxicas llevadas a
cabo en leucocitos obtenidos de la sangre periférica. De ellas la prueba
linfocitotoxica es probablemente la más segura.

La importancia de las pruebas cruzadas (cross match) permanecen en vigor

porque a pesar del perfeccionamiento alcanzado en las pruebas de

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 70
histocompatibilidad (HL-A) y más formas de inmunosupresión, la única forma de
rechazo del trasplante que no permite virtualmente modulación terapéutica es el
rechazo irreversible inmediato mediado por anticuerpos preformados específicos
para el donante. Los pacientes presensibilizados por transfusiones sanguíneas,
embarazos o trasplante previo se identifican por la reactividad de los sueros frente
a un panel de leucocitos.
En las pruebas cruzadas donde se enfrenta el suero de pacientes (receptores de
trasplantes) con linfocitos del donante se deben de realizar de manera obligatoria
inmediatamente antes del trasplante.
Parece haber un acuerdo universal respecto a trasplantes de riñón y corazón, no
en el hígado, referido a que la presencia de anticuerpos calientes específicos para
las células T del donante conduce habitualmente a rechazo hiperagudo, que es el
que prácticamente no existe en el trasplante de hígado, lo que lo coloca en una
posición inmunológica privilegiada.

AUTOTRASPLANTES
El autotrasplante se define como la transferencia de un órgano o parte del mismo
de un sitio a otro en el mismo organismo.
Es una técnica antigua comparada con otras formas de trasplante, porque además
no presenta el problema del fenómeno de rechazo inmunológico. El mismo posee
sus limitaciones por poseer necesidad de dependencia de nutrición del injerto y
por el riego sanguíneo disponible en el nuevo sitio, esto último se ha ido
mejorando en los últimos años al mejorarse las técnicas quirúrgicas y sobre todo
con la introducción de las técnicas microquirúrgicas que han permitido la
anastomosis de pedículos vasculares de pocos milímetros de diámetro.

El autotrasplante es una técnica utilizada por muchas especialidades quirúrgicas.

Existen muchos ejemplos de órganos y tejidos que se utilizan como autotrasplante
como son: la piel, músculo, huesos, nervios, segmentos de arterias y venas,
glándulas endocrinas, médula ósea y también algunos segmentos del aparato
gastrointestinal.

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 71
Algunos autotrasplantes de tejidos pueden ser mixtos o complejos que incluyen
más de un tipo de tejido utilizándose la combinación de algunos de ellos de
acuerdo a las necesidades de la zona receptora del organismo, como por ejemplo
un defecto traumático en una extremidad puede necesitar un segmento óseo
acompañado de músculo y con una porción de piel que cubra finalmente el
defecto, estos tres tejidos pueden trasplantarse al unísono en una sola pieza con
ayuda de un pedículo vascular (arteria y vena) que nutra todos los tejidos a la vez,
lo que es factible con las técnicas microquirúrgicas modernas.

El injerto de piel es el tipo de autotrasplante más utilizado, puede ser de dos tipos:
injertos libres, en los cuales la piel se separa por completo del riego sanguíneo
durante su transferencia e injerto pediculado en el cual se mantiene un riego
sanguíneo transitorio o permanentemente entre la zona dadora y la receptora,
generalmente estas últimas se movilizan a manera de un tubo o colgajo. Estos
tubos incluso pueden hacerse caminar cierta distancia mediante división y
reinserción repetidas hasta llegar al sitio receptor planeado. El hueso es el
segundo tejido más utilizado como autoinjerto, desde que Mullen repuso parte del
cráneo de un perro en 1809.
En el momento actual se utiliza frecuentemente para reparar estructuras faciales,
pérdidas del maxilar inferior, nariz, músculo y suelo de la órbita, en Ortopedia se
utiliza mucho para estimular la consolidación de fracturas y en artrodesis.

Los sitios donadores para injerto óseo más frecuente son: la cresta ilíaca, el
peroné y la costilla. Estos segmentos óseos pueden ser utilizados como injerto
libres o en el momento actual vascularizados con la realización de
microanastomosis vasculares con la ayuda de la Microcirugía. Los injertos de
nervios también se utilizan actualmente para restaurar la inervación de
determinados defectos nerviosos siendo los más usados el nervio safeno externo
y la rama auricular del plexo cervical superficial.

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Desde el punto de vista experimental y clínico se ha hecho muchos intentos con
autotrasplantes de casi todas las glándulas endocrinas como el tiroides,
paratiroides, páncreas, hipófisis, ovario y testículo. Desde 1975, Wells y
colaboradores demostraron la supervivencia de autotrasplantes de glándulas
paratiroides en el hombre, demostrando que dichos injertos producían hormonas
paratiroidea.

Se han realizado también el autotrasplante de testículo no por motivos de función

endocrina, sino para asegurar la espermatogénesis en el caso del testículo no
descendido pues durante el desarrollo intrauterino el testículo se encuentra en la
cavidad abdominal y desciende por el conducto inguinal hacia el escroto en el
momento que termina la gestación pudiendo ocurrir que no descienda quedando
en posición ectópica o bien en la cavidad abdominal o en el conducto inguinal
(criptorquídea). La intervención quirúrgica consiste en hacer descender el mismo a
su posición normal en el escroto junto con su riego sanguíneo, lo cual se realiza
movilizándolo o descendiendo y revascularizándolo mediante técnicas
microquirúrgicas.

En los últimos años ha habido un rápido avance del trasplante de médula ósea,
siendo la terapéutica de elección para pacientes con inmunodeficiencia combinada
severa, anemia aplástica severa, leucemia mieloide aguda en primera remisión y
leucemia linfoide aguda en segunda remisión, se ha utilizado también en el
tratamiento de otras hemopatías malignas, varios tumores sólidos y diversas
enfermedades genéticas. El mismo tiene como objetivo reemplazar las células
hematopoyéticas (malignas, defectuosas o ausentes) del receptor por un tejido
hematopoyético o inmune normal, así como permitir la utilización de dosis de
irradiación y de drogas antineoplásicas a niveles mucho más efectivas sin la
limitación de la depresión medular. Debemos considerar que el trasplante de
médula ósea es un método curativo y nunca se ha visto con un intento paliativo.

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De acuerdo con la fuente de células hematopoyéticas y con la relación genética
entre el receptor y el donante, hay tres tipos de trasplante de médula ósea: el
isogénico o singénico, en el cual no hay barreras inmunológicas para el trasplante
y ejemplo de ello es el que se efectúa entre gemelos, monozigóticos idénticos.
El alogénico, en el cual el donante y el receptor son de la misma especie, pero
genéticamente diferentes y el autólogo, en el cual el receptor y el donante son el
mismo individuo, efectuándose el trasplante con la propia médula del paciente
recolectada previamente.

Por último nos referiremos como último ejemplo de autotrasplante a aquellos que
se realizan con el aparato gastrointestinal muy utilizados en Cirugía digestiva, ya
que esto ha sido factible debido a que el tubo gastrointestinal es libremente móvil
con pedículos vasculares largos.
Estos procedimientos quirúrgicos han sido utilizados para crear nuevas vías de
paso donde las anteriores presentaban obstrucción por cicatriz o tumor o invertir la
dirección del peristaltismo para retardar el paso del contenido gastrointestinal o
sustituir un órgano por otro, como cuando un asa de íleon terminal repone la vejiga
o cuando un segmento de colon o intestino delgado sustituye al esófago.
Actualmente muchos de estos procedimientos se hacen más factibles con la
introducción de las técnicas microquirúrgicas permitiendo revascularizar los
órganos que se trasplantan cuando no es factible la utilización de los pedículos
vasculares con las técnicas convencionales.

En tiempos pasados se utilizó para reponer el esófago con tubos de piel de la cara
anterior del tórax, necesitando procedimientos en muchas etapas no consiguiendo
al final un mecanismo de deglución adecuado.
Posteriormente se han ido desarrollando técnicas de sustitución del esófago con el
estómago en primer lugar y después con segmentos de intestino delgado y de
colon. En el momento actual el estómago sigue siendo el sustituto más empleado
en casos de cáncer esofágico y en otros procesos benignos, el mismo puede
introducirse por el orificio esofágico o sitios bastante altos en el tórax; el estómago

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conviene para reponer el esófago en casos de carcinoma porque es un
procedimiento más sencillo que otros, se trata de una intervención que se realiza
en un solo tiempo, cosa importante pues se trata de pacientes debilitados por la
mala nutrición. El procedimiento se considera solamente paliativo, las mejores
estadísticas muestran supervivencia solamente del 17 al 34 %. Para otros
trastornos esofágicos benignos como la estenosis péptica o por sustancias
acústicas, en los cuales hay que extirpar el esófago, el cual se repone con un
segmento de intestino delgado o grueso.

El colon es el segmento más utilizado actualmente después del estómago. Aunque

se ha utilizado todos los segmentos del colon para sustituir esófago, la mayoría
utiliza el colon ascendente.
El colon después de liberado de las conexiones intrabdominales, excepto el riego
sanguíneo, puede transportarse al hiato esofágico, o llevarse por un túnel
subcutáneo preesternal o por un túnel retroesternal en el mediastino anterior.
Generalmente la vía en que se coloca es la vía retrosternal o subcutánea.
Actualmente se ha venido utilizando en la sustitución del esófago cervical un
segmento de intestino delgado, de colon, o de estómago, revascularizado en el
cuello mediante técnicas microquirúrgicas con excelentes resultados.

ALOINJERTOS U HOMOINJERTOS
Este es un capítulo muy importante y apasionante que ha ido desarrollándose
vertiginosamente en las últimas décadas sobre todo con la introducción de la
Ciclosporina A como agente inmunosupresor lo cual ha revolucionado la
trasplantología duplicando y casi triplicando la supervivencia en el trasplante de
órganos y abriendo nuevos caminos a la utilización del trasplante de algunos otros
órganos no antes utilizados. Todo esto se ha logrado gracias al avance alcanzado
en la inmunología y la terapéutica inmunosupresora con el desarrollo de nuevas
drogas. El mejor control de las infecciones, el progreso alcanzado en las técnicas

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de anestesia y el desarrollo de la terapia intensiva en las instituciones
multidisciplinarias.

En éstos años se ha establecido el trasplante renal como tratamiento idóneo de

la insuficiencia renal crónica pudiendo hablarse ya de un 80 % de supervivencia al
año de efectuado. Desde el año de 1967 se viene practicando el trasplante de
corazón con una supervivencia a corto, mediano y largo plazo igual. A partir del
año de 1981 se ha asistido a los trasplantes combinados de corazón y pulmones
en pacientes cuya cardiopatía ha lesionado secundariamente el árbol vascular del
aparato respiratorio. El trasplante hepático se viene realizando desde 1963 en
que Thomas Starzl realizó el primero en Denver, Colorado, E. U. y ya se han
hecho miles en el mundo con una supervivencia superior al 75 % en el primer año
de vida. Se han logrado trasplantes combinados de páncreas y riñón en
nefrópatas graves con diabetes mellitus, trasplantes aislados de páncreas y
trasplantes de islotes de Langerhans. El trasplante de córnea constituye un logro
más alejado en el tiempo.

En épocas recientes se incorpora el trasplante óseo de cadera con buenos

resultados y últimamente se realiza el trasplante de pulmón, aunque el primero
fue realizado el 11 de junio de 1963, por James D. Hardy en un enfermo con
enfisema pulmonar extremadamente grave, hasta el momento actual se viene
realizando con buenos resultados.

En marzo de 1967, Richard C. Lillehei realiza el trasplante de intestino delgado de

forma heterotópica de la totalidad del intestino aunque el enfermo no sobrevivió.
Para la obtención de órganos para el trasplante, actualmente existen equipos de
extracción múltiples que de un mismo donante obtienen varios órganos como el
corazón, hígado, riñones, páncreas, pulmones y también otros tejidos como hueso
y córnea. En este donante de órganos y tejidos se tiene que aplicar criterios
diagnósticos de muerte cerebral para poder declarar al paciente como
potencialmente donante. Los elementos clínicos más importantes para definir este

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estado clínico son: lesión estructural o metabólica irreversible del encéfalo,
ausencia de las funciones del cerebro y tronco encefálico, apnea de 10 minutos,
ausencia de respuesta cardiaca a la atropina y ausencia de intoxicación
medicamentosa o empleo de hipotermia.

Generalmente el análisis clínico del paciente es suficiente para declararlo en

(muerte cerebral) pero a veces es conveniente realizar un electroencefalograma o
alguna prueba que demuestre la ausencia de circulación cerebral.

TRASPLANTE RENAL
El advenimiento de más modernos y sofisticados métodos terapéuticos ha hecho
posible la mejor supervivencia de los pacientes que padecen insuficiencia renal
crónica, y entre ellos el trasplante de riñón. Alrededor de 30 pacientes por millón
de habitantes entre 50 y 55 años mueren de insuficiencia renal crónica terminal si
no son tratados y la tasa de mortalidad en los planes dialíticos oscila alrededor del
10 % anual. En nuestro medio la mortalidad anual por esta enfermedad es de 30 a
50 enfermos por millón de habitantes por año. El trasplante renal constituye el
mejor tratamiento para la mayor parte de estos enfermos terminales, ya que la
calidad de vida que ofrece es compatible con una actividad psicoprofesional
normal.

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El órgano puede ser obtenido de cadáver o de donante vivo, en este último
aspecto se ha ido incrementando en nuestro país ya que se realizan anualmente
de 70 a 80 siendo aun un número insuficiente. En EE.UU. el 25 % de los que se
realizan son de donantes vivos.
En el caso del donante de cadáver se mantiene el criterio antes expuesto de
donante con muerte cerebral ya que con el donante con muerte total los resultados
son muy inferiores por lo que prácticamente se ha abolido, no practicándose en
nuestro país.

TÉCNICA DEL TRASPLANTE

El órgano a trasplantar se preserva mediante el método de hipotermia simple, que
es de fácil realización y poco costoso, permitiendo una viabilidad del órgano hasta
las 30 horas. Se utiliza la solución de Collins que es rica en potasio y se le añade
glucosa hipertónica y en este momento se viene utilizando la solución de Belzec o
de la Universidad de Wisconsin sobre todo cuando se realiza una extracción
concomitante con el hígado obteniéndose mejores resultados.

Estos pacientes se encuentran previamente en plan de diálisis para resolver su

insuficiencia renal, por lo que consideraremos que la actividad quirúrgica comienza
mucho antes del momento del trasplante, pues para la realización de diálisis es
necesario utilizar la vía peritoneal mediante la implantación de un catéter de
Tenckoff o para la hemodiálisis extracorpórea mediante un acceso vascular,
creándose una fístula arteriovenosa de Cimino Brescia o alguna de sus variantes o
un Shunt de Scribner.

En la operación del trasplante se tiene mucho cuidado pues se considera que el

estado de inmunosupresión del paciente y los defectos de la coagulación por la
uremia crónica hacen más delicada la misma. El nuevo riñón se coloca en la fosa
ilíaca por vía retroperitoneal, por una incisión inmediatamente por arriba del arco
crural. Se coloca en posición el riñón y después se procede a las anastomosis
vasculares sin angulación ni tensión, la arteria renal se une por anastomosis

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termino-terminal a la arteria hipogástrica o ilíaca interna y la vena renal se une por
anastomosis término-lateral a la vena ilíaca externa. Después de realizadas las
anastomosis reaparece el color y la turgencia normal del órgano y en el término de
cinco minutos aparece el flujo de orina de no haber complicaciones. Se procede a
restablecer la continuidad urinaria mediante ureteroneocistostomia. Pueden existir
cambios o modificaciones en la operación del trasplante por diversas razones que
no nos interesa analizar en este momento. En el postoperatorio el paciente se
aísla durante 24 a 72 horas para los cuidados especiales que debe recibir y para
su seguimiento clínico, quirúrgico e inmunológico.

TRATAMIENTO INMUNOSUPRESOR
Existen múltiples y variados esquemas aunque la tendencia actual es la de utilizar
esteroides a bajas dosis asociadas a la Ciclosporina o el Inmuran.
La Ciclosporina es la droga que ha revolucionado la inmunosupresión en el
trasplante de órganos en los últimos cinco años, generalmente se suministra entre
10 y 17 mg/ Kg en una dosis oral de 4 a 6 horas previamente al trasplante,
continuando con igual dosis diaria fraccionada en 2 tomas, o sea media dosis cada
12 horas. A partir del día 30 del trasplante se comienza a reducir la dosis hasta
llegar a 6 a 8 mg/Kg por día como dosis de mantenimiento.
Cuando se utiliza por vía parenteral, la dosis es la tercera parte de la oral. Tiene
efecto inmunosupresor sin producir inhibición medular. Pero posee otros efectos
tóxicos como son nefrotoxicidad, hipertensión arterial, hipertricosis, hiperplasia
gingival y hepatotoxicidad. La nefrotoxicidad que puede producir es aguda o
crónica, estando en relación directa con sus niveles en sangre, considerando
óptimos entre 50 y 200 ng/ml., pues al sobrepasar esta dosis se produce el daño
renal que cede al disminuir la dosis.
Es muy importante por lo tanto, mantener los niveles en sangre óptimos para la
Ciclosporina, para lo cual se realiza un estricto monitoreo, empleándose con este
fin técnicas basadas en radioinmunoensayo y en cromatografía.

COMPLICACIONES

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Todo paciente trasplantado de riñón está expuesto a un número importante de
complicaciones, propia de la intervención quirúrgica y de la terapéutica
inmunosupresora y por lo tanto tendremos complicaciones clínicas, quirúrgicas e
inmunológicas.
Entre las complicaciones clínicas tienen la insuficiencia renal precoz no
inmunológica, la hipertensión arterial, complicaciones sépticas de tipo bacteriana,
micóticas y virales, complicaciones hepáticas, gastrointestinales por la presencia
de ulceras y sangramiento digestivo, complicaciones hematológicas del tipo de la
osteonecrosis asépticas de las extremidades articulares, la aparición de tumores
malignos en la piel y cerebro, reticulosarcoma y linfomas, al parecer en relación
con los inmunosupresores utilizados, pueden existir otras complicaciones como
diabetes, trastornos neuropsiquiátricos, flebitis, pancreatitis, etc.

TRASPLANTE HEPATICO
Con la experiencia obtenida en el trasplante renal se comenzó a realizar este
trasplante en el tratamiento de la hepatopatía terminal. Sin embargo el hígado es
un órgano mucho más complicado y la disfunción origina trastornos funcionales
infinitamente más complejos, teniendo los enfermos la desventaja adicional de no
poseer un método para el sostén artificial comparable a la diálisis renal que
pudiera encargarse de las funciones trastornadas del órgano durante la espera
para un donante adecuado o en el período postoperatorio crítico.
El hígado trasplantado debe funcionar de manera eficaz prácticamente desde el
momento de la anastomosis o el paciente fallece.
A pesar de estos inconvenientes, en el momento actual se ha logrado
supervivencia humana de años y se ha ido demostrando que los trasplantes
hepáticos ya se van acercando en la actualidad a alcanzar los mismos resultados
que con el trasplante renal, el problema radica en la indicación del trasplante, en la
edad del paciente y en su estado general. La mayor supervivencia alcanzada es
en los niños, donde por otra parte la técnica del mismo puede resultar más
sencilla.

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El mismo está indicado en las enfermedades hepáticas irreversibles y progresivas
que no responden a los tratamientos habituales y en pacientes generalmente no
mayores de 55 años, aunque en el momento actual se han realizado en sujetos
mayores a esa edad.

TRASPLANTE DE PANCREAS E ISLOTES PANCREATICOS

Se ha demostrado que la diabetes insulino dependiente se debe a un defecto de
secreción de insulina por el páncreas exocrino.
La secreción de insulina por las células de los islotes de Langerhans se ajusta
constantemente por numerosos factores, en particular por la cantidad de glucosa
sanguínea.
La insulinoterapia discontinua periódica permite corregir en cierta manera la tasa
periférica de la glicemia pero no aporta una regulación permanente y no impide las
complicaciones degenerativas (angio y neuropatías) de la diabetes. El trasplante
de células beta de los islotes de Langerhans presenta la ventaja de implantar
solamente el tejido necesario endocrino, pero necesita una preparación
importante; mecánica y química para su extracción, en el curso de la cual las
células pueden sufrir importantes modificaciones siendo técnicamente difícil de
obtener un número suficiente de células para el implante.
En el hombre los resultados no han sido satisfactorios y continúa
experimentándose esta posibilidad. El trasplante pancreático ha aparecido como
un método posible de tratamiento de la diabetes.

En el año 1964 se realizaron las primeras operaciones por Kelly y Lillehei los
cuales trasplantaron el duodeno-páncreas a los primeros 10 pacientes. La
realización de suturas en pacientes inmunodeprimidos hizo que presentaran
complicaciones graves seguidas del fallecimiento de éstos. Groth en 1975
modificó con buenos resultados la técnica original realizando injertos pancreáticos,
con segmento del órgano anastomosado a un asa yeyunal en Y de Roux.

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En 1976 Dubernard suprimió la secreción exocrina inyectando y ocluyendo por
inyección de una resina sintética que se solidificaba en contacto con el jugo
pancrático (neopren). Estos dos métodos permitieron la consolidación de la
técnica al aumentar el tiempo de supervivencia del órgano y del receptor.
Nuevas técnicas y modificaciones han permitido realizar satisfactoriamente y con
riesgo menor estas intervenciones. El uso de la Ciclosporina A que a su vez
permite la reducción de otras drogas inmunosupresoras en particular los
esteroides, en estos pacientes diabéticos ha mejorado los resultados de la técnica.

INDICACIONES DEL TRASPLANTE PANCREATICO-RENAL

En pacientes diabéticos insulino dependientes con insuficiencia renal que
presentan además complicaciones degenerativas importantes (retinopatía,
angionuropatía). Es necesaria la evaluación cuidadosa de las lesiones
cardiovasculares que complican el pronóstico vital del receptor. El mejor momento
para el trasplante pancreato-renal está representado en el período predialisis
cuando la filtración glomerular es superior a 10 ml/mt.
Actualmente se evacua la posibilidad del trasplante pancreático en pacientes no
renales en los casos de pacientes insulino resistentes y en los que las
complicaciones degenerativas (retinopatía, neuropatía diabética, etc.), condicionan
un pronóstico de vida, con mayor riesgo que el tratamiento quirúrgico y la
inmunosupresión.

V.- CONCLUSIONES:

El transplante de órganos
Se puede realizar con personas vivas o en estado cadavérico. En el caso de las
personas vivas, deben estar lo suficientemente informadas: conocer los riesgos de
la operación y estar conscientes de hacerlo voluntariamente. En el estado
cadavérico, la posibilidad de donación empieza desde la declaración de muerte
encefálica, realizada por un neurólogo o neurocirujano, que termina siendo la
condición médica básica para realizar este acto. La Ley peruana N ° 30473
establece que los familiares de los peruanos que decidan donar órganos a su
muerte no podrán revocar la voluntad de esta persona tras su fallecimiento.

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Los trasplantes de órganos de cadáveres son de aquellos que han consentido su
voluntad de ser donadores en vida, lo cual se efectiviza a través de su aceptación
al realizar el trámite de DNI.

Actualmente, los órganos que se pueden donar en el Perú son los riñones, el
hígado, el corazón, los pulmones, el páncreas y el intestino. Estos seis órganos
permiten realizar ocho trasplantes y salvar la vida a la mayoría de los receptores.
Asimismo, se pueden donar y trasplantar tejidos (conjunto de células con
funciones similares),

PROBLEMA No. 1
Si se realizara un injerto de hígado de un mono a un receptor humano, qué debe
ocurrir desde el punto de vista inmunológico y por qué y como se denomina a este
tipo de injerto.
Respuesta:

De realizarse este tipo de injerto ocurriría una reacción de rechazo de carácter

agudo, mucho más rápido y fulminante y en un período de tiempo menor, producto
de ser tejidos desde el punto de vista inmunológico totalmente incompatible,
conociéndose como xenoinjerto, ya que el donante y receptor son de distintas
especies.

PROBLEMA No. 2
Si un paciente joven que ha sufrido un trauma craneal severo con pérdida de la
conciencia se demuestra en el examen clínico que cae en coma profundo con
pérdida de reflejos, teniendo períodos de apnea de 10 minutos de no ser ventilado
adecuadamente.
¿Qué cuadro clínico presenta el paciente, que pronóstico tiene y que usted
pensaría respecto al mismo?
Respuesta:

Pensaría que el paciente presenta un cuadro de muerte encefálica y por lo tanto

su pronóstico es fatal debiendo discutirse colectivamente y declararlo como
posible donante de órganos pues al existir muerte cerebral estamos realmente
ante un fallecido aunque aún se mantenga latiendo el corazón.

PROBLEMA No.3
Un paciente de 40 años de edad portador de una cirrosis alcohólica que ha
presentado ascitis y crisis de encefalopatía, continua ingiriendo diariamente
bebidas alcohólicas y un facultativo lo remite para que sea sometido a un
trasplante de hígado. ¿Qué Ud. pensaría al respecto?
Respuesta:

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El paciente es potencialmente un candidato al trasplante pero por ser alcohólico
activo esto es una contraindicación absoluta, excepto que haya dejado de ingerir
alcohol en los últimos 6 meses.

PRACTICA Nº 15
LAS ENFERMEDADES AUTOINMUNITARIAS

I.- INTRODUCCION:

Una de las características del sistema inmunitario tradicionalmente aceptada es su

capacidad para distinguir lo propio de lo ajeno. La mayor parte de los animales son
capaces de reconocer una amplia serie de materiales extraños y de generar
reacciones contra ellos, pero en circunstancias normales no ponen en marcha
respuestas inmunitarias contra los antígenos propios, por lo cual se toleran a sí
mismos.
El reconocimiento de lo propio desempeña una función importante en la génesis
de los receptores inmunitarios de los linfocitos T y B y una función primordial en el
reconocimiento de los antígenos nominales por los linfocitos T pero, en general, se
evita el desarrollo de respuestas inmunitarias potencialmente nocivas contra los
autoantígenos. La autoinmunidad, por tanto, representa el resultado final del
fracaso de uno o más de los mecanismos básicos que regulan la tolerancia
inmunitaria
Una enfermedad autoinmune es una enfermedad caracterizada por acción de los
efectores inmunológicos hacia componentes de la propia biología corporal. En
este caso, el sistema inmunitario se convierte en el agresor y ataca a partes del
cuerpo en vez de protegerlo. Existe una respuesta inmune exagerada contra
sustancias y tejidos que normalmente están presentes en el cuerpo. Las causas
son un tanto desconocidas, pero está relacionada con el reconocimiento protéico

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entre las superficies de las membranas celulares del sistema inmunitario y las que
forman el organismo.
Así, cuando las glucoproteínas de reconocimiento no coinciden, el sistema
inmunitario comienza a atacar al propio organismo. La causa por tanto, tiene que
ver a veces con la predisposición o mutación genética que codifican proteínas
diferentes bien en las células inmunitarias u orgánicas.
ENFERMEDADES DE NATURALEZA AUTOINMUNES:

Específicas de órgano • Uveítis

• Anemia perniciosa Multiorgánicas o sistémicas
• Asma • Artritis reumatoide
• Atrofia gástrica • Enfermedad de Behçet
• Cirrosis biliar primaria • Esclerodermia
• Colangitis esclerosante • Esclerosis lateral amiotrófica
primaria • Esclerosis múltiple y su
• Colitis ulcerosa variedad Enfermedad de Devic
• Diabetes mellitus tipo 1 • Espondiloartropatía
• Diabetes mellitus tipo 2 • Fibromialgia
• Enfermedad celíaca • Fiebre reumática
• Enfermedad de Crohn • Granulomatosis de Wegener
• Enfermedad de Graves • Lupus eritematoso sistémico
• Hepatitis autoinmune • Polimiositis y Dermatomiositis
• Miastenia de Lambert-Eaton • Polirradiculoneuropatía
• Miastenia gravis desmielinizante inflamatoria
• Mixedema primario crónica
• Neuropatías • Psoriasis
• Oftalmía simpática • Púrpura trombocitopénica
• Pénfigo vulgar inmune
• Síndrome de Goodpasture • Sarcoidosis
• Síndrome de Miller-Fisher • Síndrome de fatiga crónica
• Tiroiditis de Hashimoto • Síndrome de Guillain-Barré

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 • Síndrome de Sjögren • Vitíligo
• Vasculitis sistémica
Según una reciente revisión (Shoenfeld), el coste anual directo en USA para
diferentes enfermedades autoinmunes sería (en billones dólares):
Artritis reumatoide - 22.15 Síndrome de Sjögren - 10.3 Diabetes tipo 1 - 7.1
Esclerosis múltiple - 5.4 Colitis ulcerosa - 3.2 Enf. de Crohn - 3.2
Lupus eritematoso - 2.5 Psoriasis - 1.8

CASO CLÍNICO Nº 1
Mujer de 30 años, puérpera de 30 días. Recién nacido con bloqueo cardíaco
congénito y rash cutáneo. Consulta por la posibilidad de enfermedad autoinmune.
Tuvo embarazo normal. Artralgias +, no artritis, sequedad ocular. No tiene
antecedentes mórbidos de importancia.
Exámenes: Hemograma, perfil bioquímico y orina normal. Anticuerpos
antinucleares, anti Ro y La+.
Dx.: ENFERMEDAD AUTOINMUNE MATERNA DE TRANSMISIÓN
TRANSPLACENTARIA
Explique:
Su diagnóstico requiere un alto índice de sospecha y es importante tanto para el
niño como para la madre. El 50 % de las madres están asintomáticas en el
momento del diagnóstico del LEN, pero pueden desarrollar en el futuro una
enfermedad del tejido conjuntivo; el otro 50 % ya presentan, en su mayoría, un
síndrome de Sjogren o un lupus eritematoso sistémico (LES)
En la exploración física se observaron varias placas eritematosas no descamativas
de configuración anular de 1 a 3cm de diámetro localizadas en el tronco, el cuero
cabelludo y el área del pañal.

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CASO CLÍNICO Nº 2
Mujer de 42 años, consulta por aumento de peso progresivo hace 6 meses.
Cansancio, fatigabilidad y palidez. No tiene antecedentes mórbidos de
importancia.
Ex. Físico: IMC 30, normo tensa, FC 96. Palidez de piel y mucosas, edema
pretibial y periorbitario. Bocio. Cardiopulmonar, abdomen y examen articular son
normales.
Ex. Laboratorio: Hematocrito 34, Hb 10, VCM 109, VHS 20. Perfil bioquímico y
orina normal. TSH 30. T4 libre disminuida. Anticuerpos Antitiroideos +, Vitamina
B12 baja, ácido fólico y ferremia normal. Anticuerpos anticélulas parietales +.
Dx.: TIROIDITIS DE HASHIMOTO, ANEMIA DE CAUSA AUTOINMUNE
Explique:

es un trastorno autoinmunitario que puede causar hipotiroidismo o tiroides

hipoactiva. En raras ocasiones, la enfermedad puede causar hipertiroidismo o
tiroides hiperactiva.

La tiroides es una glándula pequeña con forma de mariposa en la parte frontal del
cuello. En personas con enfermedad de Hashimoto:

el sistema inmunológico produce estudios que atacan la glándula tiroidea

se acumula en la tiroides una gran cantidad de glóbulos blancos que forman parte
del sistema inmunológico
la tiroides se lesiona y no puede producir suficientes hormonas tiroideas
Es más probable que una persona desarrolle la enfermedad de Hashimoto si tiene
otros trastornos autoinmunitarios como:

enfermedad celíaca , un trastorno digestivo que daña el intestino delgado

lupus NIH, un trastorno crónico o de largo plazo que puede afectar muchas partes
del organismo
artritis reumatoide NIH, un trastorno que afecta las articulaciones
síndrome de Sjögren NIH, una enfermedad que causa resequedad en los ojos y la
boca
diabetes tipo 1, una enfermedad que se presenta cuando la concentración de
glucosa en la sangre, también llamada azúcar en la sangre, es demasiado alta

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 87
CASO CLÍNICO Nº 3
Varón de 66 años con ampollas y ulceraciones orales de 2 meses de evolución.
Lesiones ampollares epidérmicas, mas recientes en cuero cabelludo y tronco. No
relata prurito, ingesta de fármacos, ni exposición a tóxicos. Ha bajado de peso por
menor ingesta alimentaría.
Ex. Físico: Segmentario normal. Nikolsky +
Laboratorio: Discreta anemia NN, VHS 50. Biopsia de piel: Vesículas
intraepìdermicas. IFD de piel: Depósito de IgG en la superficie de keratinocitos.
Dx: PENFIGO VULGAR
Explique:

El pénfigo vulgar (PV) es un trastorno autoinmunitario de la piel. Consiste en la formación

de ampollas y úlceras (erosiones) en la piel y las membranas mucosas.
El sistema inmunitario produce anticuerpos contra proteínas específicas en la piel y las
membranas mucosas. Estos anticuerpos rompen los enlaces entre las células cutáneas.
Eso lleva a la formación de una ampolla. La causa exacta se desconoce.

En casos poco frecuentes, el pénfigo vulgar es causado por ciertos medicamentos, que
incluyen:

Un medicamento denominado penicilamina, el cual elimina ciertos materiales de la sangre

(agente quelante).
Medicamentos para la presión arterial denominados IECA.
Fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE)

CASO CLÍNICO Nº 4
Mujer de 22 años, CEG reciente. Febrículas, artralgias y poli artritis. Eritema malar
y lesiones eritematosas en cuello. Disnea reciente y edema de ambas
extremidades. Ha notado orinas espumosas y oscuras. Usa anticonceptivos orales
hace un año.
Ex Físico: Afebril, normotensa, Fc. 100x’, Fr 24x’. Eritema malar. Ulceras orales.
RR 2T. SS. Disminución mv y crepitación en bases. Ascitis. Edema extremidades.
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Artritis asimétrica de pequeñas y grandes articulaciones
Laboratorio: Anemia NN, Leuco y linfopenia. Plaquetas 90.000 VHS 89. PCR
normal. Albúmina 2.7, PT 8.1. Creatinina 2.5 mg/dl. Proteinuria, Hematuria y
cilindros hemáticos.
Rx Tórax: derrame bibasal. Cardiomegalia discreta.
ANA+, DNA+, RO, y Sm +.Complemento C3 y C4 bajos.
Dx: LUPUS ERITEMATOSO SISTÉMICO
Explique:

El lupus eritematoso sistémico (LES) es una enfermedad autoinmunitaria. En esta

enfermedad, el sistema inmunitario del cuerpo ataca por error el tejido sano. Este
puede afectar la piel, las articulaciones, los riñones, el cerebro y otros órganos.

Causas
La causa del LES no se conoce claramente. Puede estar asociada a los siguientes
factores:

Genéticos
Ambientales
Hormonales
Ciertos medicamentos

Los síntomas varían de una persona a otra, y pueden aparecer y desaparecer. Todas las
personas con LES padecen dolor articular e hinchazón en algún momento. Algunas
desarrollan artritis. El LES generalmente afecta las articulaciones de los dedos de las
manos, las manos, las muñecas y las rodillas.

Otros síntomas comunes incluyen:

Dolor torácico al respirar profundamente.

Fatiga.
Fiebre sin ninguna otra causa.
Malestar general, inquietud o sensación de indisposición (malestar).
Pérdida del cabello.

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BIBLIOGRAFÍA RECOMENDADA

• Janeway CA, Travers P, Walport M, Shlomchik MJ. Inmunobiología. 2003. El

sistema inmunitario en condiciones de salud y enfermedad. 2ª edición.
Masson.
• Abbas AK, Lichtman AH, Pober JS. 2002. Inmunología Celular y Molecular.
4ª edición. McGraw-Hill-Interamericana.
• Regueiro JR, López-Larrea C, González S, Martínez E. 2003. Inmunología.
Biología y patología del sistema inmune. 3ª edición. Editorial Médica
Panamericana.
• Sell S. 2001.Immunology, Immunopathology and Immunity. Sixth edition.
ASM Press, Washington D.C.
• Folds JD, Normansell DE. 1999. Pocket Guide to Clinical Immunology. ASM
Press, Washington D.C.
• Kaufmann SH, Sher A, Ahmed R. 2002. Immunology of Infectious Diseases.
ASM Press, Washington D.C.
• Yotis W, Friedman H. Appleton & Lange’s. 2001. review of Microbiology and
Immunology. 4th edition. Appleton & Lange Reviews: McGraw-Hill.
• Kuby J. 2003. Immunology. 5th edition. W.H. Freeman and Company, cop. New
York.
• Parslow TG. 2001. Medical Immunology. 10th edition. New York: Lange
Medical Books/McGraw-Hill Medical Publishing Division, cop.
• Rojas Espinosa O. 2002. Inmunología. 2ª edición. Editorial Médica
Panamericana.
• Parham P. 2000. The Immune System. First edition. Garland Science
Publishing.
• Roitt I, Brostoff J, Male D. 2000. Inmunología. 5ª edición. Ediciones Harcourt,
S.A. (Madrid).
• Roitt IM, Delves PJ. 2003. Inmunología. Fundamentos. 10ª edición. Editorial
Médica Panamericana.
• Peña J. 2001. Inmunología clínica. Bases moleculares y celulares. Aran
ediciones S.A.

M.C. JESÚS RUIZ BACA / M.C. LESLIE CAROL AHUMADA LEÓN | INMUNOLOGIA Y VIROLOGÍA 90
 • Paul WE. 1999. Fundamental Immunology. 4th edition. Lippincott-Raven
Publishers, Philadelphia-New York.

BIBLIOGRAFÍA PARA LAS CLASES PRÁCTICAS.

• Ausubel FM et al. Current Protocols in Molecular Biology. Wiley Interscience.
New York.
• Coligan JE et al. Current Protocols in Immunology. Wiley Interscience. New
York.
• Harlow E, Lane D. Antibodies: a laboratory manual. Cold Spring Harbor
Laboratory. New York.
• Rose NR, Hamilton RG, Detrick B. 2002. Manual of Clinical Laboratory
Immunology. Sixth edition. ASM Press, Washington D.C.
• Ruiz B, J. 2009. Manual de Biología Celular y Molecular. Facultad de
Medicina Humana. USP. Chimbote, Perú. 68 p.
• Ruiz B. J y Ahumada L. C. 2009. Manual de Inmunología clínica y
Experimental. Trujillo. Perú.

http://www.hematologyatlas.com/principalpage.htm

http://www.sld.cu/galerias/pdf/uvs/cirured/sustituciones_y_trasplantes

_de_organos.pdf

http://www.scribd.com/doc/263487/NORMA-TECNICA-PARA-LA-

VACUNACION-SEGUN-EL-AMPLIADO-DE-INMUNIZACIONES

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 ANEXOS

PRACTICA Nº 14
SUSTITUCIONES Y TRASPLANTES DE ÓRGANOS

Respuesta 01: De realizarse este tipo de injerto ocurriría una reacción de rechazo
de carácter agudo, mucho más rápido y fulminante y en un período de tiempo
menor, producto de ser tejidos desde el punto de vista inmunológico totalmente
incompatible, conociéndose como xenoinjerto, ya que el donante y receptor son de
distintas especies.

Respuesta 02:
Pensaría que el paciente presenta un cuadro de muerte encefálica y por lo tanto
su pronóstico es fatal debiendo discutirse colectivamente y declararlo como
posible donante de órganos pues al existir muerte cerebral estamos realmente
ante un fallecido aunque aún se mantenga latiendo el corazón.

Respuesta 03:
El paciente es potencialmente un candidato al trasplante pero por ser alcohólico
activo esto es una contraindicación absoluta, excepto que haya dejado de ingerir
alcohol en los últimos 6 meses.

PRACTICA Nº 15
LAS ENFERMEDADES AUTOINMUNITARIAS

Respuesta 01:
Diagnostico: Enfermedad autoinmune materna de trasmisión transplacentaria.

Respuesta 02:
Diagnóstico: Tiroiditis de Hashimoto.
Anemia de causa autoinmune

Respuesta 03:
Diagnostico: Pénfigo vulgar

Respuesta 04:
Diagnóstico: Lupus eritematoso sistémico
Compromiso hematológico, articular, cutáneo, pulmonar, cardiaco? Renal +
criterios inmunológicos.

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PRINCIPIO

SIDA (síndrome de inmunodeficiencia adquirida)

Se caracteriza por cambios en la población de linfocitos T. En los infectados del virus de la persona causa un
agotamiento de una subpoblación de células T. Las células llamadas linfocitos T helper, que deja a estos
pacientes susceptibles a infecciones oportunistas y algunas neoplasias.

La presencia del virus en el paciente hace que el sistema inmunitario para provocar la producción de anti-VIH-
1 o VIH -2 anticuerpos. Los exámenes para la detección de estos anticuerpos anti-VIH-1 o VIH -2 anticuerpos
son ampliamente utilizados para identificar a los pacientes infectados y para el tamizaje de la sangre de
productos derivados.

El GP-41 péptidos sintéticos derivados de VIH -1 y la glicoproteína transmembrana y GP-36 procedentes de

VIH -2 representa un sitio antigénico principal de anticuerpos anti-VIH. Un fragmento de esta proteína se ha
producido en el laboratorio con la ayuda de tecnologías avanzadas de la ingeniería genética.

RED DOT-VIH-1 y 2 ™ es una membrana rápida basado en ensayo de inmunodiagnóstico para la detección
del VIH -1 & 2 anticuerpos. La prueba utiliza un péptido antígeno del VIH (VIH -1/HIV -2) en la superficie de la
membrana que "captura" de anticuerpos en el suero que están contra el VIH -1/HIV -2. Anticuerpos
capturados son visualizados con un conjugado de oro coloidal una proteína resultante en un punto rojo.
La ausencia de anticuerpos en el suero está indicado por una membrana blanca y limpia.

La muestra se permite pasar a través de la membrana inmovilizados con antígenos peptídicos VIH. VIH -1 & 2
anticuerpos en la muestra positiva quedará obligado a los antígenos inmovilizados en la membrana. Proteína
A continuación, el oro se añadirá a obligar a la parte conjugada de los anticuerpos del VIH a fin de dar un color
rojo distintos puntos de la membrana.

El kit de prueba representa la segunda generación de modernas pruebas de anticuerpos del VIH. Los ensayos
de primera generación el uso del antígeno del VIH que se purifica a partir de células que han sido infectadas
con el virus. El ensayo se utiliza una proteína viral como antígeno que se ha producido en el laboratorio de t
que con la ayuda de tecnologías avanzadas de la ingeniería genética. El material utilizado en esta prueba no
está aislado de la proteína del virus de la dotación.

ESTA material es 100% no infecciosa y altamente específico. Este producto es un examen de detección de
anticuerpos del VIH. Todas las pruebas positivas deben ser confirmadas con una segunda prueba (Western
Blot o la prueba de inmunofluorescencia)

REACTIVOS
1. De suero de estabilización.
2. Conjugar oro.
3. Tampón de lavado.
4. La reacción de la célula (dispositivo de prueba).

INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO
1. No fumar ni comer o beber o pipeta por la boca en el laboratorio,
2. Usar guantes desechables cada vez que la manipulación de muestras del paciente.
3. Use una solución al 5% de hipoclorito de sodio para limpiar los derrames.
4. Tratar a todos los materiales utilizados en la prueba como si fueran infecciosos. Autoclave todos los
materiales durante 1 hora a 121,5 grados Celsius. Añadir Hipoclorito de sodio a los residuos líquidos a fin de
alcanzar una concentración final de 1%.
5. Utilice una pipeta para cada muestra y luego descartarlo como un bio-residuos peligrosos.
6. Una vez que el ensayo se ha iniciado, todos los pasos subsiguientes deben realizarse sin interrupción y en
los plazos recomendados.

RECOGIDA DE MUESTRAS
1. La pieza se puede extraer por punción venosa o método de la yema del dedo conveniente. Después de la
reacción completa del coágulo, se separa el suero para la prueba.
2. Las muestras de suero deben guardarse refrigerados. Si la prueba es que se prolongue en exceso de 24
horas, las muestras deben ser congeladas. La contaminación bacteriana puede producir proteínas para
desnaturalizar.
3. Las muestras de suero deben ser probados en las seis horas después de la recolección, si se conserva a
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temperatura ambiente. Si se retrasa la prueba, las muestras deben ser refrigeradas (2 ° a 8 ° C) o se
conservará congelada (por más tiempo de almacenamiento). Suero puede ser refrigerada hasta 24 horas.
4. Cuando se descongelan las muestras congeladas, se debe mezclar cuidadosamente y exceso de
sedimentos removidos por centrifugación antes de su uso.
5. Si las muestras deben ser enviadas por correo, agregar el timerosal 0,01% (m / v) para las muestras de
suero y el envío por el medio más rápido disponible.
6. Si las muestras de sangre fresca se van a utilizar, asegúrese de que el anti-coagulante se añade.

PROCEDIMIENTO DE PRUEBA

A. PREPARACIÓN DE LA PRUEBA DEL VIH

1. Prepare una hoja de datos para identificar el envase individual para cada espécimen.
2. Mantener los reactivos a temperatura ambiente antes de usarlo.
3. Abra una bolsa para obtener el dispositivo de prueba cuando estén listos para probar una muestra.
Al agregar soluciones para el dispositivo, asegúrese de dejar en remojo en soluciones antes de proceder al
siguiente paso. Soluciones y muestras (suero) debe añadirse al círculo interno del dispositivo. Consulte el
diagrama.
B. DETERMINACIÓN DE LOS ENSAYOS muestras de suero.
1. Añadir 2 gotas de buffer en el dispositivo.
2. Añadir 1 gota de la muestra de suero con una pipeta desechable previstas en cada bolsa.
3. Añadir 2 gotas de buffer.
4. Añadir 2 gotas de solución de lavado.
5. Añadir 2 gotas de oro Conjugado.
6. Añadir 2 gotas de solución de lavado.
7. Leer el resultado en la membrana en 2 minutos.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

POSITIVO: Si dos puntos rojos son visibles (figura 1), la muestra contiene el VIH -1 & 2 anticuerpos. La
prueba de punto puede tener cualquier forma o oink / rojo y puede ser la intensidad de color diferente.
Figura 1
El procedimiento de control positivo es un punto de IgG de conejo que ha sido inmovilizada en la superficie de
la membrana. Este control verifica que los reactivos de la prueba (conjugado de oro coloidal, lavarse, buffer, y
el VIH -1 & 2 dispositivos) están funcionando y que se han añadido los reactivos en el orden correcto
NEGATIVO: Si sólo hay un punto rojo (control de punto) es visible (Figura 2), la muestra no contiene el VIH
detectable -1 & 2 anticuerpos. Un color ligeramente rosado se puede desarrollar en la superficie global de la
membrana que puede ser considerado como negativo. Centrifugación de la muestra de suero puede ayudar a
flujo a través de la muestra de la membrana y reducir el color rosado. Un gris ligero punto de prueba se
considerará como negativa.
Figura 2
N de suero de control positivo o negativo que se necesita y por lo tanto no incluidos en los dos puntos de
prueba.

Muestras congeladas
La prueba del VIH que se utiliza mejor con muestras frescas que no han sido congelados y descongelados.
Sin embargo, la mayoría de muestras congeladas se realizará bien si se sigue el procedimiento sugerido.
1. Permitir que la muestra se descongele en posición vertical y no agitar la muestra. Esto permite que las
partículas para ubicarse en la parte inferior. Si se dispone de una centrífuga, la muestra puede ser
centrifugada.
2. Inserte la pipeta desechable debajo de la superficie de la muestra y retirar de gota de la muestra.

CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
Las muestras que son negativos en la prueba de VIH se consideran negativas y no se requieren exámenes
adicionales. Las muestras positivas deben ser examinadas de nuevo para confirmar el resultado inicial. Las
muestras repetidamente reactivas en los dos ensayos se consideran positivas para la prueba de detección.
Este producto es una prueba de detección del VIH -1 & 2 anticuerpos. Todas las pruebas positivas deben ser
confirmadas con una segunda prueba (Western Blot o prueba de inmunofluorescencia).
RED DOT-VIH 1 y 2 muestra 100% de acuerdo con los resultados obtenidos por el uso de otros
inmunológicos cualificadas pruebas de VIH.
120 muestras de suero de la serología VIH conocida evaluada de manera ciega con el punto rojo del VIH 1 y 2
™. De éstos, 37 fueron ELISA, y RED-DOT VIH positivo, y 83 fueron ELISA, y RED-DOT VIH negativo.
Sensibilidad: 100%. Especificidad: 100%

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