Validación de Métodos

Analíticos

Primera Entrega

$ de 3 1)

Pulsa
E para salir del modo de pantalla completa

Para esta terceraunidad deben tener

disponibles los apuntes de su curso de
Estadística, los cuales tendrán que estar
poniéndolos en practica durante el
desarrollo de los parámetros de validación
que veremos en la próxima entrega.
Mm V0C139; Validacion de Meto e X

€ > e 9 campusues.edusv/mod/resource/view.php?id=3070309 ex 0
de E 0 +
( Área personal -

Mis cursos Modalidad Prezencial Facultad Muttidiscipiinaria de O.. Química -

VCCI38 -

Unidad 3:
Validacion de Metodos

Iniciaremos con el concepto de Validación:

"Es confirmación por verificación y la

la
presentación de evidencia objetiva, de que los
requisitos particulares para un uso especifico
previsto son cumplidos".

0 x3

En la norma ISO/IEC 17025: 2017, se tiene lo

siguiente:
7.2.2.1 El laboratorio debe validar los métodos:
No normalizados
Los desarrollados por el laboratorio, y
Los métodos normalizados utilizados fuera de
su alcance previsto o modificados de otra
forma.

Validacion de Metodos Analíticos (video * 1)

 Debemos validar nuestros métodos cuando tenemos,
según lo descrito en la diapositiva anterior, en el
7.2.2.1 de la norma ISO/IEC 17025:2017:
Métodos No normalizados
Métodos normalizados utilizados fuera de su
alcance
Métodos normalizados modificados
Métodos desarrollados por el laboratorio
Métodos validados cuando se hacen cambios que
lo afectan

> $ Tas tx ES

La validación debe ser tan amplia como sea

necesaria para satisfacer las necesidades de la
aplicación o del campo de aplicación dados.
7.2.2.2 Cuando se hacen cambios a los métodos
validados se debe determinar la influencia de los
cambios y si afectan, se debe realizar una nueva
validación

204

lidacion de Metodos Analiticos (video 1)

 7.2.2.4 El Laboratorio debe conservar los siguientes
registros de validación

a) El procedimiento de validación usado

b) La especificación de los requisitos
c) La determinación de las características de
desempeño del método
d) Los resultados obtenidos
e) Una declaración de la validez del método,
detallando su aptitud para el uso previsto

Validacion de Metodos Analiticos (video *

u 0 1)
E

Para validar necesitamos lo siguiente:

-
Equipo:
. Que este dentro de especificación

. Que trabaje correctamente, y

. Que este calibrado adecuadamente

-
Personal competente
-
Método de validación

n Validacion de Metodos Analiticos (video 2 1)

Para validar nuestros métodos podemos realizar lo
siguiente:
1- Validación en grupos de laboratorios
. Estudios colaborativos

. Comparaciones Inter laboratorios

2- Validación en el laboratorio
. Comparando con MRC

. Comparar con otro método que ya este validado

Validacion de Metodos Analiticos (video * 1)

Antes de elaborar el procedimiento de validación

debemos definir lo siguiente:

El análisis que nos interesa

Los niveles de concentración esperados
Si existen interferencias
Tratamiento de la muestra
Grado de validación que nos interesa

Con todas las consideraciones anteriores, estamos

listos para iniciar la validación de nuestro método.
Validacion de Metodos Analiticos (video = 1)
 Los parámetros de validación, son los siguientes:

Precisión
Exactitud
Limite de detección (LDD)
Limite de cuantificación (LDC)
Linealidad/intervalo de linealidad
Selectividad/Especificidad
Sensibilidad
Robustez

Esto es todo por hoy

Que tengan feliz día!!!

 Validación de Métodos
Segunda entrega

Guía o protocolo de validación

Describe las actividades para la validación de Métodos de

ensayos no normalizados, desarrollados o diseñados por el
laboratorio, métodos normalizados empleados fuera del
alcance previsto, ampliaciones y modificaciones de los
métodos normalizados y de las verificaciones necesarias para
confirmar que un laboratorio puede aplicar correctamente los
métodos normalizados antes de utilizarlos para los ensayos.

sobre magen
 Contenido de la guía o protocolo de validación
a. Identificación apropiada
b Alcance
Descripción del tipo de objeto a ser ensayado o calibrado
Parámetros o cantidades y rangos a ser determinados
e. Aparatos y equipo, incluyendo requisitos técnicos del
desempeño.
Normas y materiales de referencia requeridos
Condiciones ambientales requeridas y cualquier periodo de
estabilización necesario.
h Descripción del procedimiento
Criterios y/o requisitos para aprobación/rechazo
j Datos para ser registrados y métodos de análisis y
presentación de resultados
k la incertidumhre o el nroredimiento de <u estimarión
2835 1x

a. Identificación apropiada

Colocar una codificación al documento que permita

diferenciarlo de otro procedimiento

b. Alcance:

Este protocolo especifica los requisitos generales de

comportamiento que deben cumplir los procedimientos de
medida para la determinación de

c. Descripción del tipo de objeto a ser ensayado o calibrado:

Colocar una breve descripción del compuesto o elemento
que determinaremos
02:10

Validacion de Metodos Analiticos (video % 2]

 d. Parámetro o cantidades y rangos a ser determinados:
Colocar que parámetros se evaluaran durante la validación,
por ejemplo linealidad, exactitud, robustez , LDD, LDC, etc.

e. Aparatos y equipo:
Para la determinación de DBO se utilizara pH metro,
termómetro, incubadora, etc.

f. Normas y materiales de referencia requeridos:

... la norma utilizada para la realización del método es
extraída de la AWWA...

tx

g. Condiciones ambientales:
... de acuerdo al método las condiciones ambientales
que se necesitan son 200 C
h Descripción de los procedimientos:
-Colocar como se maneja, transporta, almacena y prepara el
mesurando.

-Como se van a llevar a cabo la toma de datos

-Si es necesario calibrar antes el equipo, etc....

0 aso tx OAs
 l. Criterios de aprobación:
... Si R? es igual a 0.989 se acepta como lineal el métodos

J. Datos para ser registrado:

Se coloca como se presentaran los resultados de
validación, por ejemplo hacer referencia a un informe de
validación.

K. Incertidumbre:
Se puede colocar como calcularemos la incertidumbre o si
ya conocemos el valor de esta solo reportarla. .

1x a

Aspectos previos a tomar en cuenta para la validación

Para proceder a la realización de las determinaciones de los
parámetros de validación, es necesario verificar si existen
puntos que estén fuera (valores aberrantes o resultados
anómalos)

Existen varios métodos estadísticos para detectarlos:

-La prueba Q de Dixon
-La prueba d Grubbs
-La prueba t
-La prueba de Huber

tu 1238 tx a
 Parámetros de Validación

1- Precisión
La precisión de un método analítico, es el grado de
concordancia entre los resultados del ensayo individual cuando
el método se aplica repetidamente a varias alícuotas de una
muestra homogénea.

Generalmente se expresa como la desviación estándar o

desviación estándar relativa (coeficiente de variación) de una
serie de mediciones.
3.28
Validacion de Metodos Ánaliticos (video 2)

Son tres los niveles en que puede ser considerada la precisión:

1-Repetitividad: expresa la precisión bajo las mismas

condiciones operativas en un intervalo de tiempo corto.

2- Precisión intermedia: expresa las variaciones intralaboratorio

(diferentes días, analistas y equipos)

3- Reproducibilidad: expresa la precisión entre laboratorios

(estudios colaborativos)

Veamos en primer lugar la determinación de la repetividad:

0 a02 15 85
 L

Los siguientes datos sosudetesminacianes de gramos de

grasa en 100 g de leche en 10 alícuotas de la misma muestra

4.22, 4.20, 4.21, 4.04, 4.06, 4.05, 4.18, 4.17, 4.16, 4.23

Determinar la precisión del método analítico

Procedimiento:
1" Calcular la media

2" Calcular la desviación estándar

3" Calcular el %CV

Validacion de Metodos Analiticos (video = 2)

Primero aplicamos la prueba de Huber a los resultados:

Paso 1: ordenar los valores de los resultados, de menor a mayor

4.04 4.05 4.06 4.16 4.17 4.18 4.20 4.21 4.22 4.23
4.175
Paso 2: Encontramos la mediana

Paso 3: Calcular la desviación estándar entre los valores y la

mediana Xi Xm
|
-
|

0.135 0.125 0.115 0.015 0.005 0.005 0.025 0.035 0.045 0.055

Paso 4: Ordenar de menor a mayor los valores de las desviaciones

(no se repiten valores ni se incluye el cero)"
» 22 1x a
0.05 0.015 0.025 0.035 0.45 0.055 0.115 0.125 0.135
Identificamos: MAD (mediana de la desviación absoluta)

Paso 5: Calcular los limites superior e inferior de los valores

Limite superior = Xm + 3.5MAD
= 4,175 +3.5x0.45
=5.75
Limite inferior = 4.175 -3.5x0.45
= 2.6
Los valores permitidos deben estar entre 2.6 y 5.75, por lo cual
no existen resultados aberrantes o puntos outliers y se toman
todos los valores para los cálculos de parámetros.
A

2- Exactitud
Es el grado de coincidencia entre el valor obtenido de la
magnitud medida y el valor real de la misma (medida del error
sistemático)

Para evaluar la exactitud de un método se utiliza muestras de

referencia certificadas (MRC) y trazables a patrones
internacionales

El error sistemático se calcula como la desviación de un

resultado o promedio de resultados con respecto al valor de
referencia, expresado como porcentaje.
20:10
Valid: de Metodos Analiticos (vdeo
* 2)
 Así: E=|x-pulx100;dondex=mediadela magnitud medida
p p = valor real o verdadero

Ej. Para la determinación de la exactitud, tenemos:

Un material de referencia: 100 ug/Kg, con el cual se hacen 10

determinaciones de las que se obtienen los siguientes resultados
96, 97,96, 98, 97, 96, 99, 97, 95 y 97 ug /Kg

Pasos a seguir para determinar la exactitud del método analítico:

1-Calcular la media
2-Calcular el % de error (exactitud)
2:24

. 0 tx 03

Pulsa
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Validación de Métodos

Tercera entrega
Continuación de parámetros de validación

ce Metodos Analiticos [video + 3)

00582
3-Limite de Detección (LDD)
Se define habitualmente como la cantidad o concentración
mínima de sustancia que puede ser detectada con fiabilidad por
un método analítico determinado".

Otra definición del límite de detección es:

"la concentración del analito que da una señal igual al blanco
más 3 veces la desviación estándar del blanco".

LDD=3x5S), ,se considera 93% Seguro (incertidumbre del 7%)

vatidacion de Metodos Analticos (udeo 2 3)

LDD = 3.3 x S,, para una incertidumbre del 5%

Pulsa
E para salir del modo de pantalla completa

4-Limite de Cuantificación (LDC)

Es la menor concentración de analito que puede
determinarse con cierta precisión y exactitud, bajo
condiciones bien definidas.

Debido a que en el cálculo de los resultados analíticos, el

valor del blanco se resta (o el blanco se fuerza a cero) el límite
de cuantificación se puede escribir como:

LDC = 10 X Shi

Por lo que se puede decir que: LDC = 3 LDD Validacion de Metodos Analiticos (video * 3)

tx O 55
 ¿Cómo se determina el límite de detección y de
cuantificación dentro del laboratorio?

Simplemente prepara una serie de blancos y analízalos

con el método que estés evaluando. Los blancos en
muchos casos se preparan con agua destilada que está
libre del analito.

En la siguiente diapositiva encontrarán un ejemplo

práctico para el cálculo de los dos límites.

0 ES

Ejemplo:
Determinación del LDD y LDC, para el análisis de la dureza total
en agua potable empleando el método titulo métrico con EDTA.

Los datos obtenidos de los blancos en mg CaCOy/L son: 0.0161,

0.0217, 0.0154, 0.0203, 0.0126, 0.0189, 0.0161, 0.0238, 0.0189,
0.0273, 0.0217, 0.0308, 0.0189, 0.0154, 0.0203.
Promedio: 0.0199
Desviación estándar: 0.0048

LDD = 3.3 x Sbl = 0.0158 mg CaCOy/L

LDC = 10 x Sb] = 0.0480 mg CaCOy/L

0520
Validacion de Metodos Analiticos [video -3
 5-Selectividad/Especificidad
Es la capacidad del método para medir la sustancia de interés, en
presencia de los componentes, que se supone, están presentes
en la matriz de la muestra.

Las pruebas que se pueden realizar para determinarla, son:

-Método de las adiciones, comparando los resultados de la
muestra que contiene las posibles interferencias con el resultado
de otra muestra sin dichas interferencias.

-Comparación de resultados obtenidos por un método., con los

resultados obtenidos por otro método (método de confirmación)

nn 1218 1x ES

6-Sensibilidad
Capacidad del instrumento para discriminar pequeñas diferencias
en la concentración del analito.
Cambia m

Señal S LDC< Sm
/
intervalo lineal

Señalbianco Concentracion C

Sensibilidad de calibración: mC + Sbtanco

1

M= (S- Shianco)/C

uu 0324 tx 03 os
 7-Linealidad e intervalo de linealidad
Es la capacidad del método de producir resultados
directamente proporcionales a la concentración de analito
dentro de un intervalo dado.

Esta dada, para un modelo de calibración, por el coeficiente de

determinación (R2).

Una linealidad ideal indica un valor de coeficiente de

correlación
Igual a 100% (R? = 1)

S Analito
x = analito calculado
x x
x
x

X
MR (mg/mol)

y = mx+b
(S=mC + Sblanco )

0 825
 8-El intervalo de linealidad:
Es el intervalo de concentraciones entre los niveles de analito
extremos que puede utilizarse con precisión, Exactitud y
linealidad.

Se expresa en unidades de concentración

Esta ubicado entre el LDC y el punto en que cambia la

pendiente
Ver de nuevo la grafica de la diapositiva + 7 a continuación

16:28

. 0 tx

Sensibilidad
Capacidad del instrumento para discriminar pequeñas diferencias
en la concentración del analito.
Cambia m

Señal S LDC m

/
intervalo lineal

Señalblanco Concentracion C

Sensibilidad de calibración: S=mC + Sbtanco

1

M= (S- Shianco)/C

17:34
Validacion de Metodos Analiticos (vide: 0x3)
 Pulsa
E para salir del modo de pantalla completa

9-Robustez
Es la cualidad de un método que mide su capacidad para resistir
pequeños cambios en las condiciones operatorias sin que su
funcionamiento se vea alterado.

Deben considerarse como pequeños cambios los que puedan

derivarse de la transferencia de los métodos entre laboratorios,
operadores y equipos.

Se mide mediante la reproducibilidad (precisión entre la boratorios)

Validacion de Metodos Analiticos (video + 3)

Para los ejercicios de la presentación de la segunda entrega

(para resolver en su casa), las respuestas son:

Para precisión
-Media de los valores de grasa medidos: 4.152
-Desviación estándar: 0.074
-CV: 1.78%

Para exactitud
-Media: 96.8
-Error: 3.2%
10:38

u 0 tx
 Pulsa
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Validación de Métodos
Cuarta entrega

Estadística aplicada
Aleatorios: aparecen como fluctuaciones al azar en
-
Errores mediciones sucesivas
Sistemáticos: se cometen de una misma manera cada
vez que se mide.
Pueden corregirse después de calibrar.

Leyes de distribución de errores aleatorios

a) Aplicable a: -MR
Masas atómicas
Rectangular -Una sola lectura digital

-.292 Validacion de Metodos Analiticos (video * 4)

b)
Aplicable a: -Volumétricos
-Escalas análogas
Triangu ar

c)
Aplicable a: -Precisión de instrumentos:
x
pH metros
X+10 68,3%
X220 95.5% Espectrofotómetros,
etc.
99.7%

Normal
125 1x ES

Media: X =
N

Desviación estándar:
De la muestra
s=
1

N-1 E
1 -1
i

Coeficiente de dispersión: RSD = (s/ x) 100

vaiidacion de Metodos Analiticos (video +4]

 Desviación estándar: 1.
uy?
-

de la población N i=1

Coeficiente de dispersión: RSD = (o 14) 100

02:39

Validacion de Metodos Analiticos [video + 4)

LINEALIDAD
Regression lineal
ElAnálisis de regresión es una técnica estadística para la estimación
de los parámetros de una ecuación que relaciona una determinada
variable con un conjunto de variables.
El análisis se lleva a cabo mediante el establecimiento de "un

modelo" cuyos parámetros recogen y cuantifican los efectos que se

pretende estudiar.
Dichos parámetros se estiman a partir de los datos disponibles.
La razón básica por la cual se construye un modelo de regresión es
de<rrihir la natiiralez Z de tina relación en forma cuantitativa
4023 1% Ods
 REGRESION LINEAL SIMPLE

En este tipo de regresión se desea caracterizar el efecto lineal

de una única variable explicativa sobre la variable respuesta.

Los pasos para efectuar un análisis son los siguientes:

«Representación gráfica de datos
«Planteamiento del modelo
*Estimación de la ecuación de predicción

05:54
Validacion de Metodos Analiticos video * 4)

REGRESION LINEAL SIMPLE

4-30
1.REPRESENTACION GRAFICA
DE DATOS ..

o
o

primer paso para el

El Puede haber correlación

estudio de relaciones entre ra-09

variables, consiste en trazar

una gráfica de los datos
No hay correlación Correlación

(corrientemente llamado
diagrama de dispersión).
o o

Pued haber correlación

u E ES
REGRESION LINEAL SIMPLE

2. PLANTEAMIENTO DEL MODELO

La ecuación que relaciona los datos para una regresión lineal
simple es la siguiente:

B,+Px+€
Donde: fio y f1 son respectivamente la ordenada en el origen y el
nivel de variación de y por cada unidad de variación de x
(desconocidas de la recta de regresión); x variable explicativa O
una transformación de esta (ej: log x); e es el error aleatorio que
puede deberse a errores en la medición de y y/o a efectos de
varia na an madala
an Ax Q +

3. ESTIMACION DE LA ECUACION DE PREDICCIÓN

objetivo de esta etapa es hallar estimadores (bo, b1 ) de los

El
parámetros desconocidos (Bo , fB1), y obtener la ecuación de
predicción en base a los datos:

y=b,+b,x
Donde:
AN

Y esel valor de y pronosticado por el modelo para un valor de x

0:55 tx
 REGRESION LINEAL SIMPLE
La forma mas fácil de analizar la regresión, es utilizando el método
de los mínimos cuadrados

Y =3,

y Y,

0840

u 62 E ES

REGRESION LINEAL SIMPLE

Ecuaciones a utilizar

Intercepto b,=y b,x

Pendiente
m -9)_Sy
Y (x, -x) Su
Coeficient e de determinac ion R? = linealidad >R*=1

Varianza residual s? = y (», > PY

n-2

Varianza deX, s? +

Intervalo de confianza de X, > Xy + Lo.9s Sx,

u sv tx a
 DESVIACIONES Y FALTA DE AJUSTE. FORMA GRAFICA
Las desviaciones y falta de ajuste del modelo lineal pueden
determinarse a partir del análisis de los residuos.

Si en los gráficos de los residuos contra

los valores predichos y contra la
variable de regresión, se observa una +E
10
dispersión aleatoria de puntos por
encima y por debajo de la línea de Y
desviación cero, puede concluirse que E
la falta de ajuste no es significativa y
por lo tanto adoptar el modelo lineal
planteado.
» 230

Por otra parte, si en el gráfico de

residuos contra valores
predichos por el modelo lineal +e
se observan tendencias como
curvaturas, tendencias de
aumento o disminución de los
valores de los residuos al €
aumentar los valores predichos,
etc., puede concluirse que existe
una falta de ajuste significativa

13:

u 0 as tx odo
 Pulsa
E para salir del modo de pantalla completa

Validación de Métodos
Analíticos

Quinta entrega

Calculos de parámetros de validación

Validacion de Metodos Analiticosívideo + 5)

Aplicación + 1

Dadas las siguientes medidas repetidas:

10.4, 10.8, 10.9, 11.0, 11.0, 11.1, 11.2, 11.8 (n=8)
¿Es el valor menor un dato anómalo?

Solución. ( Prueba de Hubert)

Resuélvalo antes de pasar a la siguiente diapositiva

Validacion de Metodos Analiticos(video + 5)

 Paso 1. Ordenar los datos de mayor a menor

104 108 109 110 110 111 112 11.8 -8

Paso 2. Encontrar el valor de la mediana X

11

Paso 3. Calcular la desviación absoluta entre

los valores obtenidos y la mediana.
10.4 10.8 10.9 11 11 11.1 11.2 11,3

-
X 0.6 0.2 0.1 0 0 0.1 0.2 0.3

853. tx a

Paso 4. Encontrar el valor de MAD

1. Ordenar de menor a mayor los valores de

las desviaciones obtenidos
2. Identificando el valor de MAD

Xi 0.1 0.2 0.3 0.6

n 1x a
 3. Calculando MAD

MAD
0.2+0.3
2
MAD -0.25

Paso 5. Calculando el valor de los punto outliers

X, -3.5MAD X, +3.5MAD
11-3,5*0,25 11+3.5*0.25
10.125 11.875
No hay valores outliers en las mediciones tomadas

u 7:48 1x a

Aplicación + 2 (de repaso)

Un laboratorio acreditar el análisis de plom en
sangre, la calidad de uno de sus analistas, ara
lo cual, el director de calidad del laboratorio ha suministra $ al
analista una muestra de sangre (muestra ciega para que
determine el contenido de plomo (El limite máximo tolerable
de plomo en sangre en hombres adultos es de 40 ug/dL).
El analista repitió el análisis 10 veces y los resultados (en g/dL)
que obtuvo fueron los siguientes:

1008 17.51, 10.29, 10.32, 12.15, 11.03, 11.77, 5.67, 12.24,

17.27

Encuentre: los puntos outliers, la media, la desviación estándar

y la desviación estándar relativa (RSD)
0425

u
 Aplicación tt 3
Los siguientes valores son las áreas relativas de los picos de los
cromatogramas correspondientes a unas soluciones estándar
X, [mol/L] Yi Area
0.5 3.76
1.5 9.16
2.5 15.03
3.2 21.42
4.5 25.33
5.5 31.97

a. Evaluar el ajuste del modelo.

b. Existe buena linealidad?

051
Validación de Metodos Analiticos(video + 5)

Solución
1.Ecuaciones a utilizar

=y-bx R? by (x - -

y)
b,
y0 -

yY
2.Calculando bo y b1
Xi Yi Xi-Xm Yi-Ym (Xi-Xm)(Yi-Ym) (Xi-Xm)?
0.5 3.76 -2.5 -13.85 34.625 6.25
15 9.16 -1.5 -8.45 12.675 2.25
2.5 15.03 -0.5 -2.58 1.29 0.25
3.5 20.42 0.5 2.81 1.405 0.25
4.5 25.33 1.5 7.72 11.58 2.25
5.5 31.97 2.5 14.36 35.9 6.25
Xm =3 Ym 97.47 ALA
=17.61

un 820 tx O4:
 3. Calculando bo y b1

Y (x-xXy-y) 97.47
=p-,x=17.61-5.57*3
b,
Y (xx)
bd,
17.5
b, =09
b, =5.57

R*= y)_ 97.47*5.57

260 -

y) 543 .58

4. Ecuación
Y= 0.9+5.57X
Para demostrar que en realidad esta ecuación se comporta
linealmente hay que realizar un análisis de residuos.

15 a

Para hacer este análisis, calcularemos el valor de Y con la ecuación

Y
obtenida, la diferencia entre el valor obtenido de y el valor
obtenido por el analista es lo que se conoce como residuo.

Xi Yi Y Yi-Y1
Graficando el residuo contra Xi
0.5 3.76 3.685 0.075
15 9.16 9.255 -0.095
25 15.03 14.825 0.205
3.5 20.42 20.395 0.025
Residuos

45 25.33 25.965 -0.635

+

5.5 31.97 31.535 0.435

Xm=3 Ym =17.61

u €
 Aplicación 4 (de repaso)
En la determinación espectrofotométrica de hierro con tiocianato
en sal solar, utilizando un Spectronic-20, se obtuvieron los
siguientes resultados para la curva de calibración normal:

ppm 0.450 0.910 2.050 2.280 2.920 4.050 4.500

Abs 0.088 0.167 0.327 0.346 0.481 0.647 0.690

Encuentre el modelo de calibración. ¿Existe muy buena linealidad?

» 208

Recordemos estos conceptos:

Limite de detección: es la señal mas pequeña provocada por la

presencia de un analito observada a un nivel de confianza del 95%.

Limite de cuantificación: es la cantidad mínima cuantificable a un

nivel de confianza del 95%.

Condiciones para estimar LDD y LDC.

Estimación a partir de la curva de calibración, preparando

soluciones estándares diluidas, cercanas a la señal del blanco y
que obedezca a un modelo de una línea recta.
09:04

. 0 tx 5 85
 $b, +b,x
3.298, 0

b,
3.295,, =B,LDD

LDD 32950 3.2955 b,

b, b,

ape 1050 108), -b,

b, b,
10:23

Aplicación H 5
En la determinación por voltamperometría de hipoclorito en
aguas, se realiza una curva de calibración a partir de los siguientes
datos:

ppm 0.5 1.0 3.0 6.0

pA 0.18 0.41 0.71 0.91

Encuentre el modelo de calibración. Calcule la desviación estándar

del intercepto. Evalué los valores de LD y LC

NOTA: La desviación estándar del intercepto se calcula según la ecuacion:

sa X
2

2
S; 2
nY (x, x)
o

0:38

0
 Pulsa
E para salir del modo de pantalla completa

Validación de Métodos
Sexta entrega

Incertidumbre de la Medición

Ax

La norma ISO/IEC 17025: 2017, en el punto 7, nos dice:

7.6 Evaluación de la incertidumbre de medición

7.6.1 Los laboratorios deben identificar las
contribuciones a la incertidumbre de medición.
Cuando se evalúa la incertidumbre de medición, se
deben tener en cuenta todas las contribuciones que
son significativas, incluidas aquellas que surgen del
muestreo, utilizando los métodos apropiados de
análisis.
Validacion de etodos (video 0 6)
 7.6.2 Un laboratorio que realiza calibraciones, incluidas
las de sus propios equipos, debe evaluar la
incertidumbre de medición para todas las calibraciones

7.6.3 Un laboratorio que realiza ensayos debe evaluar la

incertidumbre de medición
Cuando el método de ensayo no permite una evaluación
rigurosa de la incertidumbre de medición se debe
realizar una estimación basada en la comprensión de los
principios teóricos o la experiencia práctica de la
realización del método.
u 81 1x a

¿Qué es la Incertidumbre de la Medición?

"Parámetro asociado al resultado de una medida, que caracteriza la

dispersión de los valores que podrían razonablemente ser atribuidos
al mensurando"

En palabras más simples, la incertidumbre es la duda que todo

resultado de medición lleva implícito, es decir, nunca podrás
conocer el valor verdadero de un resultado de medición.

Esa duda se representa por medio de un intervalo de valores con

una cierta probabilidad de cobertura, llamado intervalo de
confianza, que suele ser del 95 %. Este factor de cobertura se
representa con a etra K y para un n ve de conf anza de 95 %, K=2
u y 12:63 1x A ES
 Fuentes de incertidumbre:

En la práctica, la incertidumbre de un resultado puede

surgir de algunas posibles fuentes, siendo algunos
ejemplos la definición incompleta del mensurando, el
muestreo, efectos de matriz e interferencias,
condiciones ambientales, incertidumbres de equipos
másicos o volumétricos, valores de referencia,
aproximaciones y asunciones incorporadas en el
método de medida y procedimiento, y variaciones
aleatorias
09:22 Valid: de metod: 6)

. 0

Componentes de la incertidumbre:
Al estimar la incertidumbre global, puede ser
necesario tomar cada fuente de incertidumbre y
tratarla de forma separada para obtener la
contribución de esa fuente.

Cada una de las contribuciones separadas a la

incertidumbre es un componente de la incertidumbre.

Cuando se expresa como desviación estándar, un

componente de la incertidumbre se conoce, como
incort octándar
11:50 1x
 Error e incertidumbre:

Es importante distinguir entre error e incertidumbre.

Error: Se define como la diferencia entre un resultado individual

y el valor verdadero del mensurando.
En la práctica, el error de una medida observada es la diferencia
entre el valor observado y el valor de referencia.

El error, como tal ya sea teórico u observado es un solo valor.

- -

En principio, el valor de un error conocido puede aplicarse como

la corrección al resultado.
05.40

Valid: de metodos (vid: 0) x* q

La incertidumbre, por otra parte, toma la forma de un

rango o un intervalo, y si se estima para un
procedimiento y tipo de muestra definida, puede
aplicar a todas las determinaciones realizadas del
mismo modo.

En general, el valor de la incertidumbre no se puede

utilizar para corregir un resultado de medida.

» 22 1x a
 ¿Cómo calcular la incertidumbre de la medición?

En esta guía se explica el método de la GUM (Guide to the

Expression of Uncertainty in Measurement), o también llamado
método ISO GUM o método botton up.

En esencia el método consiste en:

«Definir el mensurando.
eIdentificar las fuentes de incertidumbre.
*Cuantificar las fuentes.
«Combinar las incertidumbres típicas o estándar.
*Expandir la incertidumbre combinada multiplicándola por un
factor de cobertura K
u » 858 x% q

Proceso de Estimación de la Incertidumbre de Medida

La estimación de la incertidumbre es, en principio,

sencilla, los pasos que implica son:

Paso 1: Especificar el mensurando

Escribir una declaración sobre qué es lo que se va a

medir, incluyendo la relación entre el mensurando y las
magnitudes de entrada (p. ej. magnitudes medidas,
constantes, valores de patrones de calibración, etc.) de
las que depende 08.26
Valid de metod deo * 6
u 0 E
 Paso 2. Identificar las fuentes de incertidumbre

Listar las posibles fuentes de incertidumbre.

Esto incluirá las fuentes que contribuyen a la

incertidumbre de los parámetros que se especifican
en el Paso 1, pero pueden incluir otras fuentes, y se
deben incluir las fuentes que surgen de las
suposiciones químicas

Paso 3. Cuantificar los es ¡certidumbre

Estimar la dimensión de los componentes de la incertidumbre
asociada con cada fuente potencial identificada de
incertidumbre.

A menudo es posible estimar o determinar una contribución

única a la incertidumbre con varias fuentes separadas utilizando
los datos de los estudios de validación, datos de CC, etc.

La utilización de estos datos reduce considerablemente el

esfuerzo requerido para evaluar la incertidumbre y puesto que
se utilizan datos reales experimentales se realizan estimaciones
de incertidumbre fiables 09:59
Valid de metodos (vide $
ers to
 Paso 4. Calcular la incertidumbre combinada

La información obtenida en el paso 3 consistirá en varias

contribuciones cuantificadas a la incertidumbre global bien
asociadas con fuentes individuales o con efectos combinados de
varias fuentes

Las contribuciones se expresan como desviaciones estándar, y se

combinan según las reglas apropiadas para dar una
incertidumbre estándar combinada

Elfactor de cobertura apropiado debería aplicarse para dar la

incertidumbre expandida.
» 448 tx a

Paso 5. Expandir la incertidumbre combinada multiplicándola

por un factor de cobertura k.

Antes de entrar a desarrollar el método con un ejemplo, debes

tener claro los siguientes conceptos:

Error aleatorio:
Es el causado por efectos aleatorios, tiene un comportamiento
impredecible, no se puede eliminar, y lo único que puedes
hacer es disminuir sus efectos realizando varias mediciones
repetidas del mensurando.
13:27

. 0 o:
 Error sistemático:
Es el causado por efectos sistemáticos, tiene un
comportamiento predecible y muchas veces puede corregirse.
Incertidumbre tipo A:
Evaluación de la incertidumbre empleando un análisis
estadístico de una serie de mediciones.

Incertidumbre tipo B:
Evaluación de la incertidumbre empleando métodos diferentes
al análisis estadístico de una serie de mediciones.

Validacion de metodos (video + 6)

0

Pulsa
E para salir del modo de pantalla completa

Validación de Métodos

Séptima entrega

Ejemplo de calculo de Incertidumbre

de la medición
Validacion de Metodos li leo +7)
 Ejemplo sencillo:
Calculo de la incertidumbre para encontrar la densidad de una
solución de NaCl al 2%.

Paso 1: Define el mensurando.

La definición del mensurando es el paso clave del ciclo para que a
partir de ahí puedas desarrollar los pasos siguientes.

d=m/V

En este caso la densidad (d) es el mensurando, y la masa.(m) y el

vo umen V) son las magnitudes de entrada.
fideo *n
. 0
Valid: de Metod
02563 tx

Paso 2: Identifica las fuentes de incertidumbre.

Siguiendo con el ejemplo de la densidad te puedes dar cuenta

que las fuentes de incertidumbre provienen de:

El proceso del pesaje:

Aquí se incluye una incertidumbre tipo A debida a la precisión

(repetibilidad) de realizar el pesaje, una incertidumbre tipo B
debida a la calibración de la balanza y una incertidumbre tipo B
debida a la resolución del display de la balanza.
IMAN 31:30 1x A ES
 El proceso de la medición del volumen:

Aquí se incluye una incertidumbre tipo A debida a la precisión

(repetibilidad) de medir el volumen, una incertidumbre tipo B
debida a la calibración del picnómetro y una incertidumbre tipo
B debida a la temperatura
Validacion de Metodos (video + 7)

Estas fuentes de incertidumbre "limitadas" son

suponiendo que todo el proceso de medición está
controlado.

La identificación de las fuentes depende de cuanto

O
a AD
03

Paso 3: Cuantifica las fuentes de incertidumbre

Aquí es donde la mayoría de personas se enreda pero si has hecho

bien los pasos anteriores no tendrás ningún problema en este paso

Para que todo salga bien sigue es principio

Todas las incertidumbres (tipo A y tipo B) deben estar en forma de

desviaciones estándar, para la tipo A no hay problema debido a que
se calcula como una desviación estándar común y corriente, el
problema es para las tipo B, estas dependen de la función de
probabilidad que les aplique.
» 2857 tx a
 Así las cosas, pueden tener funciones de probabilidad triangulares
y rectangulares, no te asustes, para las triangulares solo debes
dividir entre raíz cuadrada de 6, y para las rectangulares entre raíz
cuadrada de 3.

La incertidumbre se estima de la siguiente manera:

Cuando el mensurando se define mediante una suma o una resta,

por ejemplo:
Y=X,+X,0Y=*, -X,, la incertidumbre es:
2 2
u(y) ulx, ) + u(x> y

27:18 1x ES

Cuando el mensurando se define mediante una multiplicación

o una división, por ejemplo:

Y= X,X, 0 Y=X,/X,, la incertidumbre es:

2 2
u(y (x a (x,

BN
1

y X1 X2

Para el caso que estamos tratando, la incertidumbre

se calcula con 2 2
(m ulv)
d
BN m
+
v

tu 25:59 tx ES
 Esta formula es producto de la definición de la densidad: d = m/V.

Lo que sigue es calcular la incertidumbre combinada de la masa

u(m) y la incertidumbre del volumen u(V).

Incertidumbre de la masa:

Como se menciono antes, se incluye una incertidumbre tipo A

debida a la precisión de realizar el pesaje (repetibilidad), una
incertidumbre tipo B debida a la calibración de la balanza y una
incertidumbre tipo B debida a la resolución del display de la
halanza
u 24:45 1x ES

Todas la fuentes de incertidumbre son aditivas, por lo tanto la

incertidumbre de la masa u(m) es:

u(m)? = UA ep + UB cal
2 2
+uBL,
Donde:
UA rep* ES la incertidumbre tipo A debida a la repetibilidad
(precisión).
UB.a: Es la incertidumbre tipo B debida a la calibración de
la balanza.
UB,es: Es la incertidumbre tipo B debida a la resolución del
display de la balanza.
n 1x ES
Dentro del ejercicio de medir la densidad de una solución de NaCL
al 2% se empleó un picnómetro de 10 mL de volumen y una
balanza analítica de 4 cifras decimales.

Elcertificado de calibración de la balanza informa una

incertidumbre expandida de 0.00002 g con un factor de cobertura
K=2 al 95 % de confianza.

El método exige que se reporte el promedio de tres replicas, por

lo tanto la medición de la masa se realizó por triplicad O.

tx ES

Los resultados fueron:

Peso del
Peso del Masa de la solución
Replica picnómetro + la
picnómetro vacío solución
de NaCL al 2 %.

1 30,5432 40,5534 10,0102

2 30,5431 40,5538 10,0107

3 30,5433 40,5536 10,0103

Promedio 10,0104

Desviación estándar 0,0003

ES
 La incertidumbre tipo A siempre es igual a la desviación estándar
dividida entre la raíz cuadrada de n, donde n es el número de
réplicas, en este caso 3.

Esta fórmula también es llamada la desviación estándar de la media

0.0003
UA = =0.00017 g

La incertidumbre tipo B debida a la calibración de la

balanza es igual a la incertidumbre expandida (del
certificado) dividida entre k.
122%
Valid: de Metodos vid.
u 0 2048

0.00002
uBcal = =0.00001g
2

La incertidumbre tipo B debida a la resolución del display de la

balanza es igual a al número más pequeño que puede mostrar el
equipo (0.0001) divido entre 2 y luego entre raíz cuadrada de 3
(asumiendo una distribución rectangular).

Elvalor 0.0001 debe dividirse entre 2 debido a que se trata del

semi rango de la resolución
0.0001/2 =
ubres =
y0.000029 g

» 10:40 tx a
 De este modo ya puedes estimar la incertidumbre combinada de
la masa. el resultado es:

u(m)? = 0.00017? + 0.00001? + 0.000029? = 2.98x107* g,

u(m) = v0.0000000298 = 0.00017 g

El proceso para encontrar la incertidumbre combinada del

volumen es el mismo.

Se incluye una incertidumbre tipo A debida a la precisión

(repetibilidad) de medir el volumen, una incertidumbre tipo B
debida a la calibración del picnómetro y una incertidumbre tipo B

n $ tx 03

u(V)? = + uB?,, +
2 2
rep mm

Para encontrar la precisión del volumen del picnómetro puedes

emplear agua destilada con una densidad conocida y realizar el
llenado tres veces (como mínimo), pesar el instrumento vacío y
luego con el agua, y al final por la misma fórmula de la densidad
encontrar el volumen de agua contenido en el picnómetro.

La densidad del agua destilada a 20 *C es 0.9983 g/mlL,

este valor lo encuentras en tablas disponibles en
internet.
nn 604 tx Oa:
 A continuación los datos de la repetibilidad en el volumen.

Peso del Peso del

Masa del agua en Volumen del
Replica picnómetro vacío picnómetro + agua
en g. en g. gramos picnómetro en mL

1 30,5432 40,5526 10,0094 10,0264

2 30,5431 40,5529 10,0098 10,0268

3 30,5433 40,5528 10,0095 10,0265

Promedio 10,0266

Desviación estándar 0,00021

u 14:33 1x a

De este modo la incer Pulsa para salir del modo de pantalla completa

0.00021
UA = 0.00012 mL

Elcertificado de calibración del picnómetro informa una

incertidumbre expandida de 0.00013 mL con un factor de
cobertura K = 2 al 95 % de confianza.

La incertidumbre tipo B debida a la calibración del

picnómetro es igual a la incertidumbre expandida (del
certificado) dividida entre k.
Validacion de Metodos (video +
 0.00013
uBcal = = 0.000065 mL
2

Por último solo te queda calcular la incertidumbre tipo B debida

a la temperatura, la cual tiene un efecto directo sobre el
volumen.

La expansión térmica del vidrio del picnómetro se puede

considerar despreciable en comparación con la del líquido.

0 aso tx (A 85

Cómo ves, es clave que conozcas a profundidad el

funcionamiento de tu método de medición, dado que en el
camino debes hacer varias suposiciones para realizar los
cálculos matemáticos.

Para este caso debes suponer que la solución salina se

comporta como si fuera agua pura (ya sabes que no es cierto), y
de este modo tomar el coeficiente de expansión térmica del
agua que la encuentras en tablas en internet. El valor de este
coeficiente es 0.00021

La fórmula para los cálculos es:

0 1208 1x a
 UBrem = ATxVxf
v3

Donde AT es la máxima variación de temperatura durante la

medición, V es el volumen nominal del picnómetro y B es el
coeficiente de expansión térmica del agua.

La división entre raíz cuadrada de tres se realiza para que el

resultado quede en términos de desviación estándar asumiendo
una función de distribución rectangular.

u 37 1x a

Reemplazando los valores tienes:

5 *Cx10 mLx0.00021x1/"C
UBTem = = 0.0061 mL

La incertidumbre combinada debida al volumen es:

u(Vy? = 0.00012? + 0.000065? + 0.0061? = 0.000037 mL

u(V) = v0.000037 = 0.0061 mL

En este punto ya tienes la incertidumbre combinada debida a la
masa y la debida al volumen, así que ya puedes encontrar
la incertidumbre combinada de la densidad, que es lo que
estamos buscando.

Recordando la fórmula:
2 2

u(d) u(m) u( y
d
El m V

En esta ecuación m es el promedio de las tres mediciones de la

masa de NaCL al 2 % y V es el volumen nominal del picnómetro

Reemplazando los valores tienes lo siguiente:

2 2 2
u(a) 0.00017 0.0061 ml

d 10.0104 g 10 mi
+

= 3.7x107

u(d) = 0.00061
d

Ahora encontraremos la incertidumbre expandida, para ello solo

multiplica el resultado por K, para una probabilidad del 95 %, K es
igual a 2.
u(d) = 0.0012
tx
 Ahora lo único que queda es encontrar la incertidumbre
expandida para la densidad (U)

U = ud = 0.0012 x d

Son muchos los cálculos que se deben realizar, pero la lógica es la

misma para todos ellos.

Entre más compleja sea la ecuación para definir el mensurando,

mayores serán los cálculos a realizar para encontrar la
incertidumbre expandida.
27:12

u 0 ES

Informe de Validación de un método

Hemos cubierto lo necesario para validar un método y

elaborar el informe de validación

Uno de los objetivos de la implementación de un sistema de

calidad en el laboratorio es facilitar a cualquier persona el
desempeño de una actividad especifica, estableciendo para
ello criterios de trabajo.

Con relación a la validación, es importante que el laboratorio

cuente con un informe de validación dentro de sus métodos.
29:08

u 0 tx
 Muchas veces, nos preguntamos ¿ Como incorporar la
validación en nuestros procedimientos analíticos? ... una
forma seria: un informe de validación.

Un informe de validación es el documento que permite

establecer los aspectos mas importantes de un método de
validación.

20:30

u 0 ES