ALANZ VALERIO CARLOS ENRIQUE. CERVANTES GARCA ROCO. DAZ LPEZ ROSALINDA. IBARRA RAZURA JOS FCO.
RODRGUEZ ESTRADA BRENDA GPE.
La evolucin de la instrumentacin en hematologa se inici a mediados de 1950. Los profesionales del laboratorio clnico en ese tiempo realizaban manualmente: Conteo de clulas hematocitmetro. Hemoglobinas espectrofotomtricamente. sanguneas en el
Contador automtico de clulas sanguneas
Hematcritos con centrifugacin. determinadas
Exmenes microscpicos de frotis de sangre. Datos con fiabilidad. Precisin y exactitud
La automatizacin actualmente cubre las principales pruebas en el laboratorio de hematologa. Conteo completo de clulas sanguneas. La cifra de plaquetas. Anlisis Diferencial.
La automatizacin es un sistema donde se trasfieren tareas de produccin, realizadas habitualmente por operadores humanos a un conjunto de elementos tecnolgicos.
Dos principios para los instrumentos son: Se han usado varios principios para el conteo de las clulas sanguneas y el anlisis diferencial. Principio de Impedancia. Principio de dispersin ptica de la luz
PRINCIPIO DE LA IMPEDANCIA EN EL CONTEO DE CLULAS SANGUNEAS
Intrumentos que usan este principio: Se basa en el aumento de la resistencia producida cuando una clula sangunea con baja conductividad pasa a travs de un campo magntico. El nmero de intermitencias indica la cifra de las clulas sanguneas. La amplitud de cada intermitencia es proporcional al volumen de la clula. El contador Coulter. TOA Sysmex. Abbott Cell-Dyn.
PRINCIPIO DE LA DISPERSIN PTICA DE LA LUZ EN EL CONTEO DE CLULAS SANGUNEAS Se basa en las mediciones de la dispersin de la luz obtenidas de una sola clula sangunea que pasa a travs de un haz de luz (ptico o lser).
Las clulas sanguneas crean una dispersin haca delante y una lateral las cuales se detectan mediante fotodetectores.
El grado de dispersin hacia delante es una medicin del tamao de la clula. El grado de dispersin lateral es una medicin de la complejidad o granularidad de la clula.
Este principio se usa por los instrumentos
Technicon H System.
INSTRUMENTOS DE IMPEDANCIA
Contador Coulter serie S-Plus
Las clulas son diluidas en un diluyente conductor elctrico y dos electrodos estn suspendidos en esta dilucin separados por una abertura. Al pasar las clulas individuales a travs de la abertura hay un aumento en la resistencia entre los dos electrodos, la cual es proporcional al volumen de la clula.
Se establecen lmites umbrales para el conteo de cada poblacin de clulas con base en el volumen celular.
QU SON LOS HISTORAMAS?
Conocidos tambin como curvas de distribucin de tamao. Son registros del nmero de clulas con un parmetro definido. Por ejemplo, un histograma de eritrocitos registra el nmero de eritrocitos con lmites de tamao especficos. Los histogramas se generan por analizadores celulares. Se crean para las poblaciones de los eritrocitos (eritro), leucocitos (leuco) y plaquetas (PLT) basadas en el volumen celular (fL) y nmero relativo de clulas
Estos histogramas permiten la observacin de las poblaciones de clulas, su tamao promedio respecto al resto de la poblacin y su nmero relativo.
Contador Coulter STKS
Enumera: Eritrocitos Plaquetas Leucocitos 1) porcin
Para determinar un conteo diferencial de cinco partes
Se determina con tecnologa de VCD (Volumen-conductividaddispersin) Cmara que cuenta eritrocitos y plaquetas
Sangre con EDTA
2) porcin
Cmara que cuenta leucocitos
Cmara de mezcla donde se prepara una dilucin con agente ltico que elimina eritrocitos
3) porcin
Instrumentos de dispersin de luz
Sistema Technicon H*1
Realiza conteo diferencial de leucocitos con base en un anlisis de flujo continuo y tincin citoquimica con peroxidasa. Capaz de realizar una biometra hematica completa y un conteo diferencial. Aspira una muestra de sangre con EDTA y procesa porciones de esa muestra a travs de cuatro canales separados. En canal eritrocito/plaqueta determina los conteos por medio del anlisis de las mediciones de la luz esparcida al pasar clulas diluidas, una por una, a travs de un rayo lser.
El diluyente usado para los conteos de eritrocitos y plaquetas causa formacin esfrica isovolumetrica de los eritrocitos, la cual elimina errores de volumen celular a causa de variaciones en la forma de esta clula. Los eritrocitos se cuentan y se miden por medio de clculos con dispersin de luz. Las concentraciones de hemoglobina de eritrocitos individuales y el volumen celular se pueden determinar con base a estas mediciones, asi pueden obtenerse: Volumen globular medio (VCM)
Concentracin media de la hemoglobina corpuscular (CMHC).
Dentro del canal de la hemoglobina se mezcla una porcin de sangre con EDTA con el diluyente de hemoglobina.
Los eritrocitos se lisan y la hemoglobina libre se convierte en cianometahemoglobina.
La concentracin de cianometahemoglobina se determina fotometricamente a 546 nm.
El technicon H*1 evala la informacin de dos celdillas de flujo y muestra la informacin en el monitor de la computadora.
Los resultados pueden imprimirse de la computadora o guardarse en el disco duro para mantener los registros.
Comparacin de histogramas, dispersogramas y citogramas en trastornos selectos.
ANEMIA POR DEFICIENCIA DE HIERRO
Es la causa mas comn de anemia hipocromica microctica. La deteccin de eritrocitos microciticos se obtiene con la observacin del histograma de eritrocitos (ERI) con el uso del
Coulter S plus, Coulter STKS o Sysmex NE-8000
ERITROCITOS NUCLEADOS
La presencia de eritrocitos nucleados en la sangre perifrica es un indicador del aumento en la actividad electropoyetica dentro de la medula sea o de su infiltracin.
La observacion cuidadosa del diagrama de dispercion de los leucocitos (Coulter STKS), dispersograma de leuco (Sysmex NE-8000) y citogramas de leuco (Technicon H*1) indica su presencia
Coulter STKS
Un autoanalizador que determina el recuento y tamao de las clulas al detectar los cambios producidos en la resistencia elctrica cuando una partcula en un medio conductor pasa a travs de una apertura. El nmero de pulsos indica el recuento de partculas, mientras que el tamao del pulso elctrico es proporcional al volumen celular. El anlisis diferencial de los Glbulos Blancos se basa en la medida simultnea del volumen celular, la conductividad de alta frecuencia y la seal de dispersin de la luz de un lser (scatter). Esto informa sobre el volumen, contenido y caractersticas estructurales de cada clula
Los equipos son comandados por el sistema PSM (Preanalitical Systems Manager). Es un software diseado para conectar al LIS (Sistema Informtico del Laboratorio) con los instrumentos analticos, actuando adems como un buffer de datos, y herramienta de distribucin y archivo de muestras. En una palabra, PSM es capaz de controlar el flujo de muestras, solicitud de tests y resultados, determinando finalmente un destino para cada una de ellos. Sumado a esto, contiene un mdulo de control de calidad, que funciona on-line, de manera de bloquear cualquier test que no cumpla con los estndares prefijados.
22 parmetros + % y No. de reticulocitos Autocargador de hasta 144 muestras simultneas Carga continua, con reconocimientos de muestras y controles por cdigos de barra Sin mantenimiento de rutina Puerta de comunicacin Bidireccional RS-232 para conexin a SIL La mejor reproducibilidad y exactitud del mercado Velocidad: hasta 109 muestras/hora con todos los parmetros hasta 138 muestras/hora para slo recuentosVolumen de muestra250 uL modo primario150 uL modo secundario Tecnologas: Principio Coulter: Recuentos por triplicado de Eritrocitos, Leucocitos y plaquetasFotometria: HemoglobinaVCS: Para la diferenciacin de Leucocitos y Reticulocitos
Manipulacin de muestras SIN FALLA (FAILSAFE) garantiza el proceso de muestras. Solamente Coulter ofrece el Sistema de Manipulacin de Muestras SIN FALLA (FAILSAFE) para reducir riesgos asociados con el proceso de las mismas. Asegura identificacin positiva de muestras el nico sistema que lee el cdigo de barras de la muestra y la posicin del casette al mismo tiempo de la aspiracin. La integridad de la muestra es tambin revisada por sensores que detectan muestras cortas, cogulos y otras muestras comprometidas, y automticamente instruye al STKS a suprimir resultados invlidos.
Reduccin mxima de diferenciales manuales. El COULTER STKS proporciona resultados de diferencial superiores en ,tan bajo como 100 clulas/ uL. Una combinacin de tecnologas innovativas asegura altos resultados cuantitativos precisos, separacin superior de poblacin de clulas, deteccin de clulas de tipos anormales sin precedente y estabilidad de muestras Esta infraestructura permite la resolucin 24 horas. de grandes volmenes de trabajo,
cumpliendo con las ms rigurosas normas de calidad internacionales.
INSTRUMENTOS ELECTROMECNICOS
BBL FibroSystem
Electrodo mvil
Instrumento para coagulacin semiautomtico (1960)
Electrodo estacionario Pozo de calentamiento Botn de reinicio
Brazo de la sonda
Pozo de reactor
Barra para control de tiempo
Lector digital
El principio de deteccin del cogulo es el principio electromecnico
Lector digital Fijacin al bloque de preparacin trmica
interruptor
enchufe
Instrumento para deteccin de cogulos ST-4 de American Bioproducts
Es un instrumento semiautomtico para pruebas de coagulacin que se basa en el principio de deteccin electromecnica del cogulo.
Incubador de 16 posiciones en
cuatro canales de incubacin y contadores de separados. Pipeta de suministro. Pozos de almacenamiento del reactivo con termostato a temperatura ambiente y a 37 C. Cuatro celdillas para anlisis de muestra.
Sistema microprocesador.
El principio de sta variacin en la deteccin electromecnica del cogulo se basa en la viscosidad creciente del plasma al formarse el cogulo.
La viscosidad creciente se detecta por movimiento de una bola de hierro situada en el fondo del pocillo de reaccin. Se crea un movimiento pendular de la bola al alternar un campo electromagntico en los lados opuestos del recipiente con el uso de dos impulsores enrollados independientes.
Al comenzar la formacin del cogulo la viscosidad del plasma aumenta y hay una disminucin correspondiente en el movimiento de la bola. El tiempo de coagulacin se determina del algoritmo de las variaciones en la amplitud de la oscilacin.
Es un instrumento para coagulacin automtico con capacidad para practicar mltiples pruebas de anlisis en acceso aleatorio.
INSTRUMENTOS DE DENSIDAD PTICA
MLA Electra 900
Est constituido por:
Un sistema de computacin con dispositivos de monitor y teclado. Sistema reactivos de almacenamiento de
Sistema de calentamientos de reactivos. Al iniciarse la formacin del cogulo de fibrina, la cantidad de luz detectada por el fotodetector disminuye y da lugar a un cambio en la produccin de seal elctrica del detector, la cual es analizada por la computadora para determinar el tiempo de coagulacin.
Hay cuatro canales pticos que permiten el anlisis simultneo de hasta cuatro recipientes de reaccin.
Las pruebas de anlisis que se pueden realizar incluyen: TP TTPa TT Fibringeno.
Organon teknika coag-A-mate x2
Sistema de almacenamiento de
reactivo de refrigerado.
Sistema de calentamiento de reactivo.
Placa de incubacin.
prueba
para
Sistema de fotodeteccin Sistema microprocesamiento. de
Instrumento automtico que utiliza el cambio en la densidad ptica producida con la formacin de cogulo como principio de para la deteccin de ste.
La adicin del reactivo final al recipiente de prueba inicia el contador de tiempo. La clula fotoelctrica detecta el cambio sbito en la densidad ptica producido con la formacin de la fibrina y el contador de tiempo se detiene. Tiene la capacidad de practicar dos pruebas simultneamente.
INSTRUMENTOS DE . DETECCIN DE CROMGENO/ COGULO
En un anlisis cromgeno, la enzima de inters (factor de coagulacin activado) escinde al sustrato cromgeno en un sitio especfico para liberar la marca cromfora.
La intensidad de espectrofotomtricamente y concentracin de la enzima. color se es proporcional mide a la
Por medio de la eleccin de los sustratos usados en un anlisis especfico, los anlisis cromgenos se pueden utilizar para realizar pruebas individuales de protenas fibrinolticas.
MLA Electra 100 C
Es capaz de practicar anlisis basados en cogulo y anlisis de cromgenos. Los anlisis de cogulo se practican de la misma manera que en el MLA Electra 900, con la adicin del muestreo automtico del paciente.
Para practicarse el anlisis de cromgeno deben cambiarse los reactivos y los tubos de ste.
Un fotodetector vigila velocidad de cambio en la densidad ptica al formarse el producto colorido. La reaccin entre el sustrato del reactivo y el material analizado libera la paranitroanilina cromfora que se mide a 405 nm. El instrumento toma una serie de lecturas y determina la linearidad de los datos y el cambio en la absorbancia por minuto.
ste cambio en la absorbancia se compara con la curva de calibracin de referencia programada en el instrumento por el laboratorio. El resultado final se determina a partir de sta curva y se informa en las unidades apropiadas.
ACL 3000
Instrumento de coagulacin centrfuga capaz de practicar anlisis de basados en cogulo y anlisis cromgenos.
El sistema de medicin del anlisis basado en cogulo es nefelometra. En sta el fotodetector mide la luz dispersa en ngulos rectos (90) del haz de luz. Antes de la formacin del cogulo de fibrina, la cantidad de luz dispersa es poca debido a la presencia de partculas finamente dispersas. Con la formacin del cogulo de fibrina se presentan partculas ms grandes y la luz dispersa aumenta. El tiempo de coagulacin se determina partir de la curva de coagulacin.
El sistema de medicin para el anlisis cromgeno es la fotometra.
La reaccin enzimtica final en el anlisis cromgeno produce paranitroanilina. La clula fotodetectora vigila el cambio den la densidad ptica a largo periodo de reaccin. La curva de coagulacin creada con el registro de los cambios y de la densidad ptica respecto al tiempo, se comparan con la curva apropiada de calibracin.
Es el anlisis de las caractersticas de las clulas que pasan una a una en una suspensin lquida a travs de un haz de luz.
Los componentes bsicos del citmetro de flujo son: Sistema lquido Sistema ptico Sistema detector de seal
Sistema de manejo de datos
El sistema lquido tiene la responsabilidad del movimiento de las muestra a travs de la cmara de flujo. Las clulas pasan a travs del lser a una celocidad de 5 000cel/seg
La fuente de luz usada para citometra de flujo es el lser de ion argn. Al pasar la clula a travs del haz de lser, dispersa la luz y los fluorocromos la absorben y la emiten nuevamente a una longitud de onda distinta (fluorescencia).
La luz se esparce en diferentes ngulos:
La dispersin hacia delante (ngulo bajo) define el tamao de la clula.
La dispersin lateral (ngulo de 90) define la granularidad o estructura nuclear.
FLUOROCROMO
ABSORBANCIA (nm)
EMISIN (nm)
Isotiocinato de fluorescena (FITC)
Ficoeritrina (PE) Ficoeritrina-Rojo Texas (PE:TR) Protena peridininclorofila (PerCP) Tiazol naranja
488
492 488 488 488
530
580 620 680 530
Auramina O
Yoduro de propidio (PY)
432
488
533
620
Inmunofenotificacin del linfocito Fue la aplicacin clnica que introdujo la citometra de flujo en el laboratorio clnico. El desarrollo de los Ab-monoclonales que no slo diferencian a los Lc B de los LcT sino que los subclasifican en sus categoras efectoras.
Su uso es el en diagnstico y establecimiento de las etapas de los pacientes con VIH.
Inmunofenotipificacin de leucemia/linfoma Las leucemias linfocticas y los linfomas malignos se clasifican como procesos B, T o pre-B con el uso de la inmunofenotipificacin. Esta ayuda en el diagnstico de ciertas leucemias mieloides
Anlisis de ploidia del DNA Es til en la identificacin de clulas tumorales. Para determinar el contenido de DNA presente en cada clula se tien con un colorante. El citmetro cuantifica la cantidad de DNA presente en c/clula y lo muestra como un histograma. Es til en la determinacin del pronostico de la malignidad y en la vigilancia de la eficacia del tratamiento.
Figura 1. Histograma diploide (izquierda), con un solo pico en G0/G1 y aneuploide (derecha) con dos picos que representan dos poblaciones celulares, la segunda localizada al doble del nmero del canal de la primera, es decir, tetraploide (ndice de
Recuento de reticulocitos
Se usa para evaluar la actividad eritropoytica de la medula osea y para la diferenciacion de las anemias, la vigilancia de la respuesta del paciente al tratamiento.
Se utiliza un colorante colorear el RNA residual. fluorescente para
Se analizan 100 clulas para determinar el porcentaje de reticulocitos as como lacifra absoluta y tambien permite determinar la madurez del reticulocito.
