Stimuler plus, stimuler
moins ?
Effet de la stimulation sur
la qualité ovocytaire.
FFER 2007
Dr Patrice CLEMENT
Département génétique et reproduction
Laboratoire CLEMENT
93150 LE BLANC MESNIL
Préovulatoire
Antraux
FSH dépendant
Préantraux
FSH indépendant
Secondaires
Primaires Atrésie
Primordiaux
SCF/cKit
TGF alpha, béta
GDF9
FOLLICULOGENESE
Follicules
Stade pré-antral
Ovocyte bloqué en fin de prophase méiotique
F Acquisition de :
- compétence à reprise de méiose
S - assurer fécondation
- assurer développement précoce
H
Stade ovulatoire Ovocyte bloqué en métaphase II
Relation étroite entre follicule et ovocyte : régulation paracrine et autocrine.
Albertini DF et al, RBM Online 2003
Compétences de l’ovocyte acquises à partir du stade antral :
-Modification structure de la chromatine
-Polyadénylation et traduction des ARNm
-Empreinte parentale
-Production GSH
-Phosphorylation des centrosomes Action FSH
-Réarrangement des microtubules sur le follicule
-Compétence à la reprise de méiose
-Capacité aux oscillations calciques
-…
?
Modification de la quantité de FSH
(Stimulation)
Qualité ovocytaire ???
! Morphologique.
! Aptitude à être fécondé et à un
développement embryonnaire
permettant une grossesse évolutive.
L ’ovocyte idéal
! Forme ronde
! Cytoplasme clair
homogène et
réfringent
! Globule polaire intact
rond ou légèrement
ovale
! EPV réduit et sans
débris
! Zone pellucide claire
Etude multicentrique : 1900 ovocytes analysés, 18 paramètres morphologiques.
Selon les équipes : 5 à 60% d’ovocytes idéaux !
M Plachot. GOF 2002
Morphologie ovocytaire
! Evaluation subjective (sauf vacuoles)
! N’évalue pas les données cytoplasmiques
moléculaires, génétiques et
épigénétiques.
! Polscope : caractéristiques du fuseau
comme critère de qualité ovocytaire.
Rama Raju GA, et al; Hum Reprod, 2007
Evaluation de la qualité moléculaire de l’ovocyte
Directe Indirecte
Développement embryonnaire précoce
-jusqu’à J3 : ARNm et protéines
Cytoplasmique ! ovocytaires
(Golgi,
R.E.,
G corticaux,
ARNm) Génétique Epigénétique
(Aneuploïdie
ovocytaire et/ou
embryonnaire)
Aneuploïdie embryonnaire
(Baart et al, 2007)
111 patientes (<38 ans, bilan J3 favorable), conjoint num Spz>5M/ml
Randomisation
Groupe agoniste GnRH Groupe antagoniste
(stimulation protocole long) (stimulation « douce »)
FISH sur embryons
(1,7,13,15,16,18,21,22,X,Y)
61 E : analyse d’une cellule 47 E : analyse d’une cellule
98 E: analyse de 2 cellules 96 E: analyse de 2 cellules
Pas de différence de profil entre les deux groupes de patientes
Aneuploïdie embryonnaire
(Baart et al, 2007)
Stimulation « Mild » stimulation p
conventionnelle
Nb patientes 40 55
Ovo obtenus 12,1 +/- 5,7 8,3 +/- 4,7 <0,01
Tx fécondation 57 +/- 28 55 +/- 30 0,8
Embryons 6,8 +/- 5 4,7 +/- 3,9 0,03
Aneuploïdie embryonnaire
(Baart et al, 2007)
Stimulation « Mild » stimulation p
conventionnelle
Examen sur 1 98 embryons 96 embryons
cellule embr
Embryons 63% 45% 0,016
aneuploïdes
(%)
Examen sur 2 61 embryons 47 embryons
cellules embr
Embryons 73% 55% 0,046
aneuploïdes
(%)
Embryons 65% 37% 0,004
mosaïques (%)
Aneuploïdie embryonnaire
(Baart et al, 2007)
! « Mild » stimulation : moins d’ovocytes,
moins d’embryons au total, mais autant
d’embryons euploïdes.
! Nb total d’embryons : pas un critère de
qualité
! Groupe « mild » :
nb embryons totaux nb embryons aneuploïdes
Aneuploïdie embryonnaire
(Baart et al, 2007)
Aneuploïdie de l’embryon : asynchronisme de maturation cytoplasmique
Utilisation des ARNm et protéines de l’ovocyte fécondé
Fin de méiose (ovocyte) Première mitose de l’embryon (J3)
Aneuploïdie homogène Aneuploïdie en mosaïque
Exemple protéine SYCP3 (souris)
(Lighfoot DA et al, 2006)
Baart : stimulation protocole long entraine le recrutement de follicules avec des
ovocytes trop immature sur le plan moléculaire
Aneuploïdie embryonnaire
Effet maternel Conditions de culture
In vitro ?
Effet paternel
Menezo et al, RBM, 2006
Difficile de lier l’aneuploïdie embryonnaire uniquement à une cause ovocytaire
Aneuploïdie ovocytaire
! Cause importante d’anomalie
chromosomique des fœtus (Boué et al,
1975)
! Corrélé avec l’âge de la patiente.
! Asynchronisme de maturation entre
cytoplasme et noyau (Battaglia et al,
1997)
! Influence de la stimulation ?
Aneuploïdie ovocytaire et stimulation de
l’ovulation
Etudes discordantes : modèles animaux
! Absence de différence de non disjonction
avec ou sans stimulation (souris)
- Hansmann I et al, Cell Genet, 1979
- Golbus M et al, Cell Genet, 1981
! Augmentation des non disjonctions en cas de
stimulation ovarienne
- Vogel R et al, Reprod Toxicol., 1992
- McKiernan S et al, HR, 1998
- Hodges C.A. et al, HR, 2001
! Quel mécanisme ? Rôle de la FSH ?
FSH et aneuploïdie
Modèles animaux
! FSH a une action sur la configuration du
fuseau méiotique
Rossi G et al, Hum Reprod, 2006
! Augmentation du taux de FSH modifie
l’alignement des chromosomes et augmente le
risque d’aneuploïdie de l’ovocyte.
Roberts R et al, Biol Reprod, 2005
! Stimulations répétées par FSH altèrent la
qualité du fuseau méiotique
Van Blerkom et al, Hum Reprod, 2001
FSH et aneuploïdie
Hammoud I et al, Poster ASRM, 2007
Dans le cadre du Diagnostic Pré Conceptionnel (biopsie 1er GP) :
•Analyse de l’aneuploïdie du 1er GP (67 patientes)
•Analyse de chaque fluide folliculaire (370) : dosage FSH, LH, Pg, E2, AMH.
Hybridation in situ sur 1er GP.
Sondes 13, 16, 18, 21 et 22
FSH et aneuploïdie
Hammoud I et al, 2007
FSH seul marqueur corrélé avec l’aneuploïdie de l’ovocyte.
Augmentation FSH est corrélée avec le nombre d’anomalies
chromosomiques
Mécanisme principal : séparation prématurée des chromatides sœur
(ayant lieu normalement à la fin de la méiose ovocytaire avec
expulsion du 2ème GP)
Questions :
•Action directe ou non de la FSH sur l’aneuploïdie ?
•Population de femmes > 36 ans et/ou échecs d’implantation.
Facteurs épigénétiques
AMP et maladies d’empreinte ?
Syndrome de Wiedemann-Beckwith:
Gicquel et al. Am J Hum Genet; 2003 ; 72:1338
DeBaun et al. Am J Hum Genet; 2003 ; 72:156
Maher et al. J Med Genet; 2003; 40:62
Déméthylation du gène maternel KCNQ1OT
Syndrome d’Angelman:
Cox et al. Am J Hum Genet 2002; 71: 162
Orstavik et al. Am J Hum Genet 2003; 72: 218
Déméthylation du gène maternel SNRPN
Large Offspring Syndrome
Young et al. Nature 2001; 27: 153
Déméthylation du locus maternel DMR2 du gène IGF2R
Mécanisme d’empreinte parentale : méthylation différentielle ADN
(maternel/paternel). Modification importante pendant la gamétogenèse.
Cinétiques de mise en place de l’empreinte génomique très différentes
entre gamétogenèse masculine et féminine.
Relation entre maladie d’empreinte et AMP ?
Mécanisme ? Influence de la stimulation ?
Empreinte génomique profondément modifiée pendant ovogenèse au stade du
follicule antral : gènes IGF2, SNRPN, PEG1, PEG2
Lucifero D et al, Hum Mol Genet, 2004
Influence d’une super ovulation sur les mécanismes d’empreinte ?
Lucifero D et al, Hum Reprod Update, 2004
Stimulation ovarienne : modification de l’empreinte génomique
Sato A et al, Hum Reprod, 2007
Analyses de gènes soumis à empreinte :
•3 gènes soumis à empreinte maternelle : PEG1, LIT1, ZAC
•1 gène soumis à empreinte paternelle : H19
Examens effectués (étude de méthylation des gènes) :
•dans l’ovaire néonatal de souris
•dans l’ovaire adulte (souris et femme) : non stimulés et stimulés.
Comparaison ovocytes stimulés / ovocytes non stimulés :
•Gain de méthylation de H19
•Perte de méthylation de PEG1
Stimulation ovarienne : modification de l’empreinte génomique
Sato A et al, Hum Reprod, 2007
Conclusion : modification du profil de méthylation par la stimulation
Questions :
•Y-a-t-il une conséquence de cette modification de profil
sur une maladie d’empreinte ?
•La modification est elle directement liée à la stimulation ?
•Le profil de méthylation est il lié à l’âge des patientes ?
•Le profil de méthylation n’est il pas la cause de l’infertilité ?
Conclusions
! Une stimulation ovarienne forte semble
augmenter le taux d’aneuploïdie des ovocytes
et des embryons obtenus.
! Le nombre total d’embryons n’est pas un
critère de qualité d’une tentative.
! Le nombre d’embryons euploïdes est un
critère qui doit être retenu
! Il est possible que la stimulation modifie le
profil de méthylation des ovocytes.
