API 20 E
L’API 20 E est utilisée pour identifier les entérobactérie (oxydase négative) ainsi que Acinetobacter
(oxydase positive)
Répartir de l’eau dans les alvéoles du fond de la boite d’incubation pour créer une atmosphère
humide
Test d’oxydase :
Il constitue le 21éme test d’identification à noter
Préparation de l’inoculum :
Ouvrir une ampoule d’eau physiologique stérile ou d’eau distillée stérile ou ampoule suspension
Medium (5mL)
Ajouter une colonie à partir d’une gélose
----> Homogénéiser pour avoir une suspension bactérienne
Inoculation à la galerie :
Introduire la suspension bactérienne dans les tubes de la galerie avec une pipette pasteur en posant
la pointe de la pipette sur le côté de la cupule toute en incluant légèrement la boite d’incubation vers
l’avant
Les cupules avec -----> Remplir la totalité de la cupule avec la suspension bactérienne
Les cupules avec ----> Ajouter la suspension bactérienne puis remplir la cupule par l’huile de
paraffine
Renfermer la boite d’incubation et l’incuber à 37°C pendant 18-24 heures
Lecture et interprétation de la galerie :
Si le nombre de tests positifs avant ajout des réactifs (y compris le test GLU) est inférieur à 3,
réincuber la galerie 24 heures (± 2 heures) de plus sans rajouter les réactifs puis révéler les tests
nécessitant l'addition de réactifs
Si 3 tests ou plus (test GLU + ou –) sont positifs, noter sur la fiche de résultats toutes les réactions
spontanées puis révéler les tests nécessitant l'addition de réactifs :
- Test TDA : ajouter 1 goutte de réactif TDA.
- Test IND : ajouter 1 goutte de réactif JAMES.
- Test VP : ajouter 1 goutte des réactifs VP 1 et VP 2. Attendre au minimum 10 minutes
Tests Négative Positive
ONPG Incolore Jaune
ADH Jaune Rouge - orangé
LDC Jaune Rouge - orangé
ODC Jaune Rouge - orangé
CIT Vert pâle - jaune Bleu-vert - bleu
H2S Incolore - grisâtre Dépôt noir – fin liseré
URE Jaune Rouge – orangé
TDA
Jaune Marron-rougeâtre
Immédiatement après l’ajout du TDA
IND Incolore – vert pâle -
Rose
Immédiatement après l’ajout du JAMES jaune
VP
Incolore – rose pâle Rose – rouge
Après 10 minutes après l’ajout du VP1 et VP2
GEL Non diffusion Diffusion du pigment noir
GLU Bleu – bleu vert Jaune – jaune gris
MAN Bleu – bleu vert Jaune
INO Bleu – bleu vert Jaune
SOR Bleu – bleu vert Jaune
RHA Bleu – bleu vert Jaune
SAC Bleu – bleu vert Jaune
MEL Bleu – bleu vert Jaune
AMY Bleu – bleu vert Jaune
ARA Bleu – bleu vert Jaune
OX Selon la notice du test utilisé
Noter + ou - sur la fiche des résultats
A l'aide du logiciel d'identification apiweb TM, identifier la bactérie correspondante
NB : A partir de la suspension bactérienne préparée, inonder une boite de gélose