COPROLOGIE
Cycle biologique
dEntamoeba histolytica
Dessins de Van NGUYEN-ANH
In Dictionnaire de Parasitologie de P.BOUREE
Diagnostic parasitologique
Intrt:
Diagnostic individuel
Enqute pidmiologique
Difficults et limites
(Diagnostic dorientation)
Diagnostic parasitologique
Milieux biologiques
Selles (coprologie)
Kopros
Urines
Sang
Autres
Peau, LBA, MO, Muscles.
Ectoparasites
Parmi tous les prils, le moindre nest pas le fcal
Gandhi, activiste indpendantiste
indien, estimait que le dveloppement
des sanitaires tait un objectif plus
important que l'indpendance.
En Afrique, la moiti des lits d'hpital sont occups par des patients souffrant
de maladies vhicules par les matires fcales.
Compte rendu
L'accs aux toilettes, enjeu mondial de dveloppement
LE MONDE | 28.10.08 | 15h05 Mis jour le 28.10.08 | 15h05
Pour rduire la pauvret dans le monde et amliorer la sant des dshrits, la mthode la
plus simple est de construire des toilettes. C'est la conclusion laquelle est parvenu le Rseau
international sur l'eau, l'environnement et la sant (Inweh), branche canadienne de l'Universit
des Nations unies. Dans un rapport rendu public le 20 octobre, ce groupe de rflexion
recommande aux gouvernements une approche plus coordonne et intgre des questions
d'approvisionnement en eau potable et d'accs des sanitaires fonctionnels.
Les chiffres font frmir : environ 2,5 milliards de personnes - plus d'un tiers de
l'humanit - utilisent des latrines qui n'offrent pas de garantie contre le
dveloppement de maladies lies aux matires fcales. Et 1,2 milliard n'ont d'autre
ressource que de dfquer dans la nature, selon des donnes collectes par
l'Organisation mondiale de la sant et l'Unicef. Ces personnes passent une demi-heure
en moyenne chaque jour faire la queue dans des installations publiques ou pour trouver un
endroit isol. Soit deux jours ouvrs par mois.
L'impact sanitaire est considrable. Les maladies diarrhiques tuent 1,8 million de
personnes chaque anne. On estime que 88 % de ces affections ont pour origine un manque
d'hygine et d'accs des sanitaires srs. Les enfants, dont 5 000 meurent chaque jour, paient
le plus lourd tribut.
En Afrique subsaharienne, la moiti des lits d'hpital sont occups par des patients souffrant de maladies vhicules par les matires
fcales. Dans le monde, 200 millions de tonnes d'excrments humains finissent dans des rivires chaque anne, contaminant les eaux
de surface, voire les nappes phratiques, avec leur lot de bactries, virus et autres parasites.
Cet enjeu sanitaire figure
rarement au premier plan de l'agenda international. "La question reste
taboue, reconnat Zafar Adeel, directeur de l'Inweh. Les politiques hsitent aborder ces problmes dans leurs discours. Ce n'est
pas "poli"." Les Nations unies ont surmont cette aversion. 2008 a t dclare anne mondiale de
l'assainissement. Et le dveloppement des toilettes tait l'un des objectifs du millnaire, dfinis en 2000 : diminuer par
deux le nombre de personnes n'ayant pas accs des sanitaires d'ici 2015.
En Occident, "les systmes de distribution d'eau sont souvent anciens. Seront-ils capables d'encaisser des vnements
COPROLOGIE
Selles
Parasites recherchs : kystes, ufs, larves,
adultes
Prlvement
Mesure des lments parasitaires
Techniques de concentration
et techniques particulires
Diagnostic coprologique
Entamoeba
coli
Douve de Chine
Entamoeba
histolytica
Entamoeba
hartmanni
Petite Douve
Bothriocphale
segmente
embryonne
Ascaris
typique
atypique
Grande
Douve
Trichocphale
Schistosoma
intercalatum
Endolimax
Giardia
Hymenolepis
nana
Taenia
Oxyure
Ankylostome
Schistosoma
mansoni
Chilomastix
Iodamoeba
Hymenolepis
diminuta
Dipylidium
Schistosoma
japonicum
10m
Entamoeba
coli
Entamoeba
histolytica
Entamoeba
hartmanni
Endolimax
Giardia
Chilomastix
Iodamoeba
50m
Douve de Chine
Petite Douve
Bothriocphale
Taenia
Hymenolepis
nana
Hymenolepis
diminuta
50m
Ascaris
Trichocphale
Oxyure
Ankylostome
Dipylidium
100m
Grande
Douve
Schistosoma
intercalatum
Schistosoma
mansoni
Schistosoma
japonicum
Prlvement
dysenterie amibienne
Mesure des lments parasitaires
Etalonnage du Microscope
Micromtre oculaire
Etalonnage du Microscope
Dterminer la longueur couverte en m par une division du micromtre oculaire
Remplacer loculaire normal par loculaire micromtrique.
Disposer sur la platine du microscope le micromtre-objet.
Etablir la mise au point des 2 chelles et faire concider les O des deux chelles.
On repre une division du micromtre oculaire qui se superpose exactement une
division du micromtre-objet ; ces deux divisions doivent tre recherches le
plus loin possible du O , de faon obtenir une meilleure prcision.
On peut ainsi en dduire la longueur de chaque division du micromtre oculaire.
Effectuer lopration pour les deux objectifs x 10 et x 40.
Micromtre objet
Micromtre oculaire
Exemple : 18 divisions du micromtre oculaire couvrent 300 m
1 division couvre donc 16,66 m
Micromtre oculaire
Techniques de concentration
Mthode diphasique: acto-actique / ther
Mthode par flottation : ractif iodo-mercurique
Mthode diphasique: acto-actique / ther
1- Dilution homogne
selles + acto-actique
- Pr dilution : 1 goutte pour examen direct
- Poursuivre la dilution
- Laisser sdimenter 10 30 sec les gros dbris
Examen Direct
2- mulsionner : oblitrer lorifice avec le pouce et agiter vivement
dilution fcale + ther
ther
dilution fcale
mulsion
3- Centrifuger 3 min 2500 trs/min : 4 couches se superposent
Phase thre
Dbris
Phase aqueuse
Culot denrichissement : PARASITES
4- Isolement du culot de centrifugation
- Dcoller lanneau de dbris avec les mors dune pince
- Eliminer dun geste sec les 2 phases liquides et lanneau
- Remettre rapidement le tube lhorizontale
Passer un tampon de coton sur les parois internes du tube
- Agiter le tube pour remettre en suspension et prlever la pipette Pasteur
Mthode par flottation : ractif iodo-mercurique
Technique de JANECKSO et URBANYI modifie
1- Dilution homogne
Selles + Eau distille
2 - Tamiser
3 - Centrifuger 2 3 min 3000 trs/min
4 - Centrifuger 2 min 2000 trs/min
Eliminer la phase aqueuse
Prlever 4 5 gouttes du film superficiel
Diluer le culot avec le ractif iodomercurique
avec une anse mtallique
Technique de KATO et MIURA
(claircissement par la glycrine)
NUMERATION DES UFS
Cette technique permet dapprcier lintensit dune infestation (Ankylostomes),
de juger de lefficacit dune thrapeutique
Frottis pais de KATO et MIURA
Principe : technique de dcoloration des selles qui permet de distinguer les ufs de
parasites dans une prparation des selles rendue translucide.
- Glycrine
100 ml
- Eau distille
100 ml
- Solution de vert malachite 3 %
1 ml
Bandes de cellophane adhsive de 20 x 30 mm immerges dans
la solution de glycrine pendant 24 heures.
Technique: Sur une lame porte-objet, dposer 50 mg de selles, recouvrir par une
des bandes de cellophane imprgne, presser laide dun bouchon de caoutchouc pour
rpartir rgulirement la selle; laisser claircir une heure temprature ambiante. Examiner
rapidement car un sur-claircissement risquerait de faire passer inaperu certains ufs
(Ankylostomes, Schistosomes).
Les rsultats sont rendus en nombre dufs par gramme de selles.
techniques particulires
sol humide
t> 25
oeuf
larve
larve strongylode
infestante
Coproculture
Strongles et Ankylostomes
Mthode en boite de Ptri
Selles
Eau
Lames + papier filtre
Incubation 25 28 C
Ajouter de leau chaque jour
Strongles : larve rhabditoide
2 jours
larve strongyloide
Ankylostomes :uf 24 heures larve rhabditoide 6 jours
larve
strongyloide
!!! Larves strongyloides infestantes par voie transcutane
techniques particulires
Mthode de BAERMANN et LEE
concentration des larves des Strongles
sol humide
t > 20
larve rhabditode
larve strongylode
infestante
Strongyloides stercoralis
Mthode de BAERMANN et LEE
Mthode biologique de concentration des larves des Strongles
selles
tamis + gaze
eau tide
raccord caoutchouc + pince
pipette
larve strongylode
Les larves se collectent dans la pipette en 2 3 heures .
Soutirer 10 ml de liquide; centrifuger lentement; examiner le culot.
Scotch test
Enterobius vermicularis
Taenia saginata
Culture damibes
Etalement de selles
Srum de cheval
coagul
Srum de RINGER
Etalement de selles
Srum de cheval
coagul
Prlvement
multiplication en 24 48 heures 37C
Examen dune prparation microscopique
Recherche et identification dufs dHelminthes et de kystes de Protozoaires
Examen systmatique entre lame et lamelle de la prparation selon le schma suivant
1 parcourir la lamelle lobjectif x 10; chaque lment intressant est
observ puis mesur l' objectif x 40
les ufs dHelminthes sont ainsi identifis.
lidentification des kystes de Protozoaires seffectue ensuite
lobjectif x 100 immersion; elle peut tre facilite par la coloration des structures
nuclaires par la coloration Violet cristal Fuchsine basique .
PROTOZOAIRES
FORMES VEGETATIVES DAMIBES
Taille
Pseudopodes
Mobilit
Cytoplasme
Noyaux
Entamoeba
coli
20 30m
Courts,
larges,lents.
Plusieurs la
fois.
Endoplasme
grossirement
granuleux.
Grosses vacuoles
bourresdinclusions.
Visibles ltat frais.
Chromatine irrgulire.
Caryosome pais, en
gnral excentr
Entamoeba
histolytica
12 25m
jusqu 40
Longs,
hyalins.
Un seul la
fois.
++++
Endoplasme finement
granuleux. Vacuoles
petites et peu
visibles. Hmaties
Difficiles voir ltat
frais.Chromatine
rgulire. Caryosome
central et punctiforme.
Entamoeba
histolytica /
dispar
12 15 m
jusqu 25
Effils,
hyalins,
rapides
+++
Endoplasme finement
granuleux.
Ectoplasme hyalin et
transparent.
Difficiles voir ltat
frais.Chromatine
rgulire. Caryosome
central et punctiforme.
Entamoeba
hartmanni
4 10m
Allongs,
hyalins.
++
Ectoplasme et
endoplasme peu
distincts.
Petites vacuoles.
Difficile voir ltat
frais.Chromatine paisse
en amas. Caryosome de
grande taille, en gnral
central.
Endolimax
nanus
8 10 m
jusqu 15
Arrondis, en
boule, clairs.
Ectoplasme et
endoplasme peu
distincts.
Petites vacuoles.
Non visibles ltat
frais. Caryosome de
grande taille, ovalaire,
excentr.
Iodamoeba
butschlii
8 15 m
Longs, en
doigt de gant,
rfringents.
Endoplasme et
ectoplasme peu
diffrencis.
Vacuoles +++
Inclusions +++
Non visible si vivante;
visible si morte.
Gras caryosome central,
arrondi, entour de
granules.
KYSTES DAMIBES
Taille
Forme
Cytoplasme
Cristallodes
Noyaux
Entamoeba
coli
15 20 m
Arrondie
Ovalaire
Clair, hyalin,
rfringent
Vacuoles +
Difficiles
voir
Forme
daiguille
18
Chromatine irrgulire
Caryosome pais et
excentr
Entamoeba
histolytica
dispar
12 14 m
Arrondie
Granuleux
Vacuoles ++
Prsence
irrgulire,
Forme de
saucisse
14
Chromatine rgulire
Caryosome central et
punctiforme
Entamoeba
hartmanni
3 10m
Arrondie
Vacuoles +++
Prsence
irrgulire,
Trapus,
Forme de
saucisse
14
Chromatine paaisse
Caryosome de grande
taille
Endolimax
nanus
8 10 m
Ovode
Rectangulaire
Hyalin
Nant
14
Caryosome en tche
Iodamoeba
butschlii
8 15 m
Polymorphe
1 vacuole
iodophile
Nant
14
Caryosome de grande
taille entour dun halo
claur
Rhizopodes
Entamoeba
histolytica
Entamoeba
hartmani
Entamoeba
coli
Endolimax nanus
Iodamoeba butsclii
Flagells
Giardia intestinalis
Chilomastix mesnilii
Autres PROTOZOAIRES parasites de lappareil digestif
Rhizopodes:
- Amibes
- Blastocystis hominis
Coccidies:
Cryptosporidies
Cyclospora
coloration dHenriksen Pohlenz
Isospora belli
( Microsporidies )
coloration de Weber
Sarcocystis hominis
Coloration des Cryptosporidies
Technique
dHENRIKSEN et POHLENZ
- Etaler sur une lame une goutte de selles liquides ou de culot de concentration
- Fixer au Mthanol 5 mn puis scher
- Colorer par la Fuchsine phnique 1 heure
- Rincer leau du robinet
- Diffrencier par H2SO4 2% 10 20 secondes
- Rincer leau du robinet
- Contre-colorer au Vert de Malachite 5% 5 mn
- Rincer leau du robinet puis scher
- Lecture lobjectif x 100
Les Cryptosporidies prennent une teinte qui varie du rose ple au rouge vermillon ,
alors que les levures se colorent en vert.
Cryptosporidium sp
Cryptosporidium sp
Isospora belli
HELMINTHES
Trmatodes
Schistosoma
mansoni
Schistosoma
intercalatum
Schistosoma
japonicum
(schistosomes)
Trmatodes
(douves)
Grande Douve Fasciola hpatica
Petite Douve Dicrocoelium dendriticum
( segmente )
( embryonne)
Douve de Chine Clonorchis sinensis
Cestodes
Bothriocphale
Diphyllobothrium latum
Tnia
Taenia saginata, T. solium
Hymenolepis
nana
Hymenolepis
diminuta
Taenia saginata
Ver entier : 2 10 m
Segment mr
limin isolment
Nmatodes
Crudits
Mains sales
Eau
Ascaris
Ascaris lumbricoides
typique
Trichocphale
Trichuris trichiura
atypique
Nmatodes
Ankylostome
Ancylostoma duodenale
Necator americanus
Oxyure
Enterobius vermicularis
Dipylidium caninum
Ascaris lumbricodes
femelle
3 5 cm
Trichuris trichiura
mle
Artfacts
SPORES VEGETALES
Pouvant tre confondues avec des kystes ou des ufs
SPORES VEGETALES
Pouvant tre confondues avec les ufs dAscaris
Pollen dartichaut
SPORES de CHAMPIGNONS
Pouvant tre confondues avec des kystes ou des ufs
Spore de morille
Spores de bolet de pin
Spores de truffe
CRISTAUX
Charcot Leyden
Acides gras
Oxalate de calcium
ARTEFACTS DIVERS
Cellule amidon
Poil vgtal
Cellules palissadiques
de lgumineuses
uf dacarien
Spire vaisseau du bois
CHAMPIGNONS
levures
arthrospores
Autres prlvements
Urines
- Schistosoma haematobium 150m
- peron terminal court dans laxe de luf
- ple oppos lperon arrondi
(parfois prsents dans les selles indpendamment de
toute souillure par les urines)
- Trichomonas vaginalis
Prlvement vaginal
- Trichomonas vaginalis
30m
forme vgtative
Tubage gastroduodnal
- Giardia intestinalis (forme vgtative)
- Strongylodes stercoralis (larves)
- Douves hpatobiliaires (ufs)
- Schistosoma japonicum (ufs)
LBA ou crachats
- Paragonimus westermani (ufs)
- 100 m
- opercule aplati rompant le contour ovode
- Scolex invagins lors de la rupture dun kyste hydatique pulmonaire
- Strongylodes stercoralis (larves)
Muscle
- larves de Trichinella spiralis
Coloration des Microsporidies
Technique de WEBER
- Raliser un frottis trs mince sur 1 cm2 avec 10 l de selle liquide, scher
- Fixer au Mthanol 5 mn puis scher
- Colorer au WEBER 90 mn
- Dcolorer dans lalcool actique 10 secondes
- Rincer rapidement dans lalcool 90
- Dshydrater successivement 1 mn par alcool 95, alcool absolu, xylne
- Montage au Depex
Microsporidies
Microsporidies
L B A : Pneumocystis carinii
L B A : Pneumocystis carinii
