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Milieux de Culture

Le document décrit les différents types de milieux de culture utilisés en microbiologie, notamment les milieux solides, synthétiques, complexes, enrichis, sélectifs et de transport. Il explique également les techniques de préparation d'une culture pure et de conservation des cultures bactériennes.

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Milieux de Culture

Le document décrit les différents types de milieux de culture utilisés en microbiologie, notamment les milieux solides, synthétiques, complexes, enrichis, sélectifs et de transport. Il explique également les techniques de préparation d'une culture pure et de conservation des cultures bactériennes.

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Milieux de culture

Milieux de culture

 Préparation nutritive destinée à la


croissance de microorganismes en
laboratoire
 Peuvent être liquides ou solides
 Milieux synthétiques
 Milieux complexes
Milieu solide
 Milieu liquide auquel on ajoute un agent de
solidification tel que l’agar-agar
 L’agar-agar est un polysaccharide extrait d’une
algue marine.
 C’est un gel qui est à l’état solide à une T° de
moins de 60°C et qui se liquéfie à 100°C.
 Permet donc l’incubation à des T° élevées.
 N’est pas une source nutritive pour les bactéries
 Permet d’obtenir des colonies isolées
Milieux synthétiques
 Milieu qui doit fournir une source d’énergie
et des éléments tels que le carbone,
l’azote, le soufre, le phosphore et des
facteurs de croissance.
 La composition chimique de ce milieu est
connue.
Milieux complexes

 Aussi appelés milieux empiriques.

 Contiennent des ingrédients dont la


composition chimique est indéterminée.
Ingrédients des milieux
complexes
 Extrait de levure ( source de vitamine B)
 Extrait de viande ( vitamines et facteurs de
croissance)
 Peptones ( source d’azote)
 Sang (élément nutritif +observation des
propriétés hémolytiques de certaines bactéries)
 NaCl : isotonie
 Phosphates: tampon
 Eau : hydratation du milieu.
Ingrédients (suite)
Indicateurs de pH
- indiquent une activité enzymatique qui
produit un métabolite acide ou alcalin
pH Acide Alcalin

Rouge de phénol 6.8 à 8.3 jaune rouge

Rouge de méthyl 4.2 à 6.3 rouge jaune

Bromothymol bleu 6.0 à 7.6 jaune bleu

Bromocrésol pourpre 5.6 à 6.8 jaune pourpre


Milieux enrichis
 Contiennent des
substances
organiques
complexes ( sang,
infusions, extraits de
levure).
 Permettent la
croissance des
bactéries plus
exigeantes.
Ex : gélose au sang
Types d’hémolyse

 Alpha (α) : hémolyse


incomplète (partielle)

 Zone verdâtre autour


de la colonie
Types d’hémolyse

 Bêta (β) : hémolyse


complète

 Zone transparente
autour de la colonie
Milieu sélectif
 Inhibe la croissance des bactéries
indésirables et stimule celle des microbes
recherchés
 Contiennent des agents inhibiteurs ( Ab,
sel, colorant)
Ex : cristal violet et sels biliaires dans la
gélose MacConkey
Milieu différentiel

 Facilite la distinction
entre les colonies de
la bactérie
recherchée et les
autres colonies
présentes sur le
même milieu.
Milieux d’enrichissement

 Milieu liquide
 Donne des conditions favorables à la
croissance d’un seul microbe donné ce qui en
favorise la multiplication
Ex : milieu sélénite utilisé dans les spécimens
de selles pour favoriser la croissance des
salmonelles et des shigelles au détriment des
autres bactéries présentes.
Milieux de transport
 Utilisés pour assurer la survie des
microorganismes fragiles présents dans
les spécimens cliniques pendant leur
transport
 Milieux pauvres en nutriments.
Préparation d’une culture pure
 But : obtention de
colonies isolées
 Colonie : masse visible à
l’œil nu de bactéries qui
proviennent toutes d’une
même cellule mère
(clones)
 Technique la plus
courante : méthode en
stries
Outils du microbiologiste
Méthode des stries
Technique des stries
Aspect des colonies
(macroscopie)
Conservation d’une culture
bactérienne
 Réfrigération

 Surgélation

 Lyophilisation
Réfrigération
 Méthode qui permet de ralentir le
métabolisme bactérien sans tuer les
microorganismes.
 Permet de conserver des cultures
bactériennes pendant un court laps de
temps
 Conservation entre 4 et 7ºC (frigo)
Congélation et surgélation
 Conservation pour une plus longue période
 Conservation des bactéries et des virus
 Culture microbienne pure dans un liquide en
suspension
 Refroidir rapidement à des T° entre –50 et –95 ºC
( - 18º C pour congélation).
 Aucune activité métabolique ; développement
totalement bloqué mais la plupart des cellules
restent vivantes.
 Permet de décongeler la culture et de la faire
croître, même après plusieurs années.
Lyophilisation ou
cryodéshydratation
 Congélation rapide d’une suspension
microbienne à des T° entre –54 et -72ºC tout en
éliminant l’eau par la création d’un vide ce qui
donne une poudre.
 Récipient scellé sous vide.
 Les bactéries sont toujours vivantes mais
dépourvues d’activité métabolique.
 Poudre peut être conservée pendant des années.
 Les bactéries peuvent être ranimées en tout
temps par hydratation avec un milieu nutritif.
MERCI POUR VOTRE
ATTENTION

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