Sistema di Sorgente Analizzatore

Settori (EB; BE; EBE …)

Introduzione Quadrupolo (Q, QqQ)
EI, CI, PD, FD, FAB,
DI, MIMS, GC, HPLC, Trappola ionica, FT-ICR
LSIMS, ESI, APCI,
CZE, CEC, ITP Orbitrap, Tempo di volo (TOF)
MALDI
Ibridi (BEqQ; QTOF ….)

Separazione degli ioni

secondo il loro rapporto
massa/carica (m/z)

Separazione degli ioni

….. nello spazio
Separazione degli ioni
….. nello spazio

Settori: elettrostatico e magnetico

Quadrupolo

Tempo di volo
 PRINCIPIO DI FUNZIONAMENTO
DI UN SETTORE MAGNETICO

m0

m0v0 m1 v0 sa
as
m0v1 v1 dim
e
m1v0 ion
m1v1 v0 v1 sp
e rs
di

SETTORE ELETTROSTATICO

v1 (m0,m1)
m0v0
m0v1
(m0,m1)v0
ia

m1v0
rg
ne
ie

m1v1
ed
ion
e rs
sp
di
 DOPPIO FUOCO
Focalizzazione di un fascio ionico
• divergente
e
• non omogeneo in energia
 1974

EBE
 EBEBE
1985-1993

Proprietà degli analizzatori:

RISOLUZIONE

m
___
R=
∆m ∆m
Mass spectra recorded at different resolutions: mass spectrum of a mixture of three isobaric species
[C19H7N]+, [C20H9]+, [C13H19N3O2]+ obtained at low resolution (black line) and at resolving power 50,000
(grey line). It is noteworthy that at low resolution the three peaks are completely unresolved.

m
___
R=
∆m

Resolution at 10% valley (left) and at full width at half maximum (FWHM, right).
Summary of some PCDDs mass spectral interferences of environmental origin

∆m = 0.08

PCDDs=polychlorinated dibenzo-p-dioxins

Performances of analyzers:

Mass accuracy

386
386.3
386.35
386.354
386.3549 [C27H46O]+•

MASS ACCURACY

Sectors (BE, EB, EBE,….)

TOF, ORBITRAP, FTICR Stoichiometry
Exact mass
The calculated mass of an ion or molecule containing a single isotope of each
atom

Accurate mass
An experimentally determined mass of an ion that is used to determine an
elemental formula

Mass Spec Terms Project: http://mass-spec.lsu.edu/msterms/index.php/Category:Mass_spectrometry_terms

VG 70-250S
m/z 900-200
10 sec/dec
Res=8.000 (10% valley)

C34H28N6O4FeS4P2F2
 X

X = Reference (PFK)

X X
X
X
X

C 0÷100
H 1÷100
N 0÷8
Fe 0÷1
S 0÷6
F 0÷4
P 0÷4
O 0÷6
 Analizzatori: il quadrupolo

Four rods arranged an equal distance from each other in a parallel manner

rf / -dc

rf 180° out of phase / +dc

 Il movimento degli ioni all’interno del quadrupolo dipende da:

1. Il loro rapporto m/z

2. Le dimensioni del quadrupolo

3. Intensità potenziale dc (U)

4. Intensità potenziale rf (V)

5. La frequenza del potenziale rf

http://people.whitman.edu/~dunnivfm/C_MS_Ebook/CH5/5_5_2.html
Hyperbolic rods

Round rods can only approximate the field generated by

hyperbolic rods - most ideal when Rrod/R0 = 1.16.

Manufacturing such a kind of rods is non-trivial

Hyperbolic Rods Quadrupoles
1946
William Stephens at the Univ. of Pennsylvania proposed the concept of
time of flight

Ion source

drift region

In an ideal case, all ions leave the source with the same kinetic
energy:

where V = accelerating voltage, v = ion velocity.

As

where D = drift length and t = the flight time

MW = 1000 Dalton; z=+1; D=1.5m; V=15 kV

1000Da × 1.672621 × 10-27 kg Da-1

t= × 1.5 m =
2 × 15000 V × 1.602 × 10-19 C
= 2 .792 × 10-5 s ≈ 28 µs

MW = 10000 Dalton V=15 kV t ≈ 88 µs

MW = 10000 Dalton V=30 kV t ≈ 63 µs

MW = 100000 Dalton V=30 kV t ≈ 20 µs

reflector

+kV
Reflectron

kV
+kV
reflectron
Spiral TOF

The spiral path is composed of 4

layered toroidal electrodes each
incorporating 9 Matsuda plates inside
its cylindrical electrode.
Ions are accelerated to 20 kV in the
ion source, and then pass through
each layer of the 4 layered toroidal
electrodes, reaching the detector.

Ion path = 17m

 Separazione degli ioni nello spazio

Analizzatore Forza Separazione in base a Range Risoluzione Massa

m/z accurata
Doppio fuoco (EB, BE) Campo Momento degli ioni + 10.000 10.000 < 1ppm
magnetico + energia cinetica
campo elettrico

Quadrupolo Campo elettrico Stabilità/instabilità 2.000- Unitaria No

e radiofrequenza 4.000 (0.2 u FWHM) (>20ppm)

Time of flight Velocità >100.000 >10.000 2-5 ppm

Separazione degli ioni

….. nel tempo

 Separazione degli ioni
….. nel tempo

Trappola ionica 3D

2D
Cella a
risonanza
ciclotronica
Orbitrap

The Nobel Prize in Physics 1989

The Royal Swedish Academy of Sciences has awarded this year's Nobel
Prize in Physics for contributions of importance for the development of
atomic precision spectroscopy

Hans Dehmelt Wolfgang Paul Norman F. Ramsey

University of Universität Bonn Harvard University
Washington Federal Republic of Cambridge, USA
Seattle, USA Germany

for the development of the for the invention of the

ion trap technique separated oscillatory
fields method and its
use in the hydrogen
maser and other atomic
clocks
 La trappola ionica

Il movimento degli ioni all’interno

della trappola dipende da:

1. Il loro rapporto m/z

2. Le dimensioni della trappola (r)
3. Il potenziale dc (U) (elettr. anello)

4. Il potenziale rf (V) (elettr. anello)

5. La frequenza Ω del potenziale

(elettr. anello)

8eU 4eV
au = qu =
mr02 Ω 2 mr02 Ω 2
Equazione di Mathieu
 Analizzatori:

La trappola ionica

rf Amplitude

Electron gate
AM
AC Amplitude
τ
Time
A B C

Separazione degli ioni nel tempo

L’elio, presente all’interno della trappola
ionica, aiuta a confinare gli ioni al
centro
 Trappola ionica lineare (2D)

Drive RF &
auxiliary AC

m
12 m
m
37 m
m
12 m

30×0.25mm
 Linear Ion Trap

760 torr 1.0 torr 1.6 × 10-3 torr 2.0 × 10-5 torr
ESI source
Heated
capillary
(350°C,20V)

Square quadrupole Octopole

(400 Vpp RF, (400 Vpp RF,
-6.5 V offset) -8.5 V offset)
Front lens Back lens
(-21 V) (22 V)
Analizzatori ibridi ….. QqIT
Hybrid Instrument with Q3 Linear Ion Trap

N2 CAD Gas
Skimmer

q0 Q1 q2 Q3

IQ2 IQ3 Exit

Orifice IQ1

linear ion trap

LINAC 3x10-5 Torr

Patented Linear Accelerator™ Trap

improved extraction efficiency to yield up
to a 100 x gain in sensitivity in ion trap
scan modes.
20,000 Da/s scan speeds
Improved excitation efficiencies and
reduced ion cooling

high-pressure collision cell accelerates

ions through the collision cell,
increases speed of analysis and
eliminates cross-talk with shorter
transit times across the collision cell
L’espulsione ASSIALE degli ioni permette di accoppiare

la trappola ionica lineare ad altri analizzatori

Electrostatic Traps
“...Static charges can not be stable in electrostatic fields...”
fields...”

Linear traps Segmented-ring traps

Orbital traps
Kingdon, 1923
The Orbitrap: a new mass spectrometer
Qizhi Hu,a Robert J. Noll,a Hongyan Li,a Alexander Makarov,b Mark
Hardmanc and R. Graham Cooksa∗

a Purdue University, Chemistry Department, West Lafayette, IN 47907, USA

b Thermo Electron (Bremen), Hanna-Kunath-Str. 11, Bremen 28199, Germany
c Thermo Electron (San Jose) 355 River Oaks Parkway, San Jose, CA 95134 USA

JOURNAL OF MASS SPECTROMETRY

J. Mass Spectrom. 2005; 40: 430–443
 Standard

High-field

Orbitrap mass
analyzers

Trajectories in the orbitrap

• Characteristic frequencies:
– Frequency of rotation ωφ
– Frequency of radial oscillations ωr
– Frequency of axial oscillations ωz
r

2
z ωz  Rm 
ωϕ =   −1
2  R 
2
 Rm 
ωr = ω z   −2
 R 
φ
k
ωz =
m/ z
U (r , z ) =
k 2
2
{ }
⋅ z − r 2 / 2 + Rm2 ⋅ ln( r / Rm )
 k
ω=
m/ z

1. Frequencies are determined using a Fourier Transformation

2. For higher sensitivity AND resolution, transients should not decay too fast

Ultra-high vacuum Ultra-high precision

 Orbitrap, FT-ICR

LTQ Orbitrap™Hybrid Mass Spectrometer

2005 - 2006

API Ion source Linear Ion Trap C-Trap

Orbitrap
Differential pumping

Differential pumping

Inventor: Dr. Alexander Makarov, Thermo Electron (Bremen)

 LTQ Orbitrap Operation Principle
1. Ions are stored in the Linear Trap
2. …. are axially ejected
3. …. and trapped in the C-trap
4. …. they are squeezed into a small cloud and injected into the Orbitrap
5. …. where they are electrostatically trapped, while rotating around the central electrode
and performing axial oscillation

The oscillating ions induce an image current into the two

outer halves of the orbitrap, which can be detected using
a differential amplifier

Ions of only one mass generate a sine

wave signal

Frequencies and Masses

k
The axial oscillation frequency follows the formula ω =
Where ω = oscillation frequency m/ z
k = instrumental constant
m/z = …. well, we have seen this before

Many ions in the Orbitrap generate a complex

signal whose frequencies are determined using a
Fourier Transformation
Orbitrap Exactive

Orbitrap Q Exactive
Orbitrap Velos

Orbitrap Elite
Orbitrap Fusion – Minneapolis 2013

2D-IT

Orbitrap
 Cytochrome C Zoom on the 8+

1545.79939
100 1545.92433
95
1545.67426
90
85 1546.04924
80
75 1545.54955
70 1546.17434
Relative Abundance

65
60
55 1545.42465
50
1546.29941
45
40
35
1546.42454
30 1545.29905
25
20 1546.54971
15 1545.17502 1546.67458
10
5
0
1544.5 1545.0 1545.5 1546.0 1546.5 1547.0 1547.5
m/z

Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance Mass Spectrometry

http://www.youtube.com/watch?v=7EHngA4S3Ws
Movimento Ciclotronico

Per mantenere lo ione in un’orbita circolare stabile occorre che:

Ne consegue che la frequenza angolare ω di uno ione con massa m e

carica q è data da:

v/r = q B/m

Frequenza ciclotronica ω

ω = q B/m (radianti/sec) ω = (q B/m)/2π (Hz)

Da notare che la frequenza ciclotronica NON dipende dalla velocità dello ione.

Perciò ioni di una stessa massa avranno tutti la stessa frequenza ciclotronica
indipendentemente dal tempo in cui entrano nella cella o dalla velocità con
cui vi entrano.
Ad esempio, la frequenza ciclotronica di uno ione monocaricato, con m/z
1000 e un campo magnetico di 7.0 Tesla, è di 107.45 kHz, ovvero compie
circa 100.000 orbite al secondo.
Se il suo stato di carica è +4 il numero di orbite al secondo diventa circa
400.000.
La cella è situata all’interno di una regione di campo omogeneo di un grande magnete
superconduttore. Gli ioni si muovono in orbite circolari alle loro frequenze ciclotroniche.
Se all’interno della cella vi sono ioni con diverso valore di m/z, essi gireranno su orbite con
un raggio molto simile ma avranno frequenze diverse.
Normalmente il raggio di un’orbita di uno ione è di circa 0.1 mm.
Se un impulso RF, sufficientemente largo (8MHz÷100kHz) da coprire l’intervallo delle
diverse frequenze ciclotroniche degli ioni che si vogliono osservare, viene inviato
all’interno della cella, gli ioni acquisteranno energia dal campo RF e si muoveranno su
orbite più larghe.
Così il segnale complessivo che esce dalla cella è un segnale composito costituito dalla
sovrapposizione delle frequenze ciclotroniche di tutti gli ioni presenti all’interno.
Inoltre questo segnale diminuisce lentamente mentre gli ioni rilassano e ritornano alle loro
orbite circolari stabili al centro della cella.
Usando la trasformata di Fourier è possibile deconvolvere il segnale complessivo e
identificare le singole frequenze.

A new ultra-high resolution FT-ICR cell with dynamic harmonization

extreme mass resolution greater than 10 million

Nikolaev EN, Boldin IA, Jertz R, Baykut G., J Am Soc Mass Spectrom. 2011, 22:1125-33
Qq-FTICR

IT-FTICR
ESI (+) of Ubiquitin 1,040,000 Resolution at m/z 779

0.09u

0.09u