如何用Matrix Gel进行体外血管生成实验？

Chamot2019

于 2025-08-28 15:22:04 发布

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Matrix Gel是小鼠肉瘤组织中提取的可溶性基底膜，包含层粘连蛋白（糖蛋白）、 IV 型胶原、巢蛋白（糖蛋白）、基底膜蛋白聚糖（硫酸乙酰肝素蛋白聚糖）等多种细胞外基质蛋白及必需生长因子。Matrix Gel基质胶已成功应用于干细胞培养、血管生成检测和组织工程等研究。

血管生成既是正常组织发育与创伤愈合的关键过程，也与多种病理状态相关。本方案可实现体外血管生成的快速定量检测。实验可采用原代或永生化内皮细胞系，本文以人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为例，但该方案同样适用于 SVEC4-10（小鼠）或 3B-11（小鼠）等内皮细胞系。根据所选细胞系特性（是否经过转化处理），需通过预实验优化管状结构形成的最佳观察时间。

本指南验证了 Matrix Gel在血管生成培养基中支持人脐静脉内皮细胞（HUVECs）体外成管的能力。

操作指南

A.a. Matrix Gel的通用操作规范

按需从-20/-80℃解冻分装的 Matrix Gel。所有操作需在冰上进行，并使用预冷的枪头与离心管。通过分装为一次性使用的小份以减少冻融次数。注意：所有接触 Matrix Gel 的耗材或培养基需预冷至冰上温度，解冻的 Matrix Gel 将在 10℃以上的温度下快速固化。

A.b. 关键材料与试剂

产品名称	供应商
Matrix Gel	Chamot Biotech
HUVEC 人脐静脉内皮细胞	ATCC
EGMTM 2 Growth Medium 血管生成培养基	Lonza

B. 血管生成实验步骤

1. 内皮细胞接种与培养。使用内皮细胞专用培养基，按 Lonza 产品手册推荐密度（5×10^3~2×10^4 细胞/cm²)接种于适宜培养容器。每 2-3 天更换培养基，待细胞汇合度达 70-90%时进行后续实验。

2. 化冻 Matrix Gel。实验前一日将基质从冷冻环境转移至 4℃冰盒，低温过夜解冻。

3. 使用 Matrix Gel 包被 96 孔板。将完全解冻的 Matrix Gel 置于冰上，轻柔颠倒混匀。取预冷 96 孔板，每孔精准加入 50 μL 基质溶液，确保液面均匀覆盖孔底。置于恒湿培养箱（37℃, 5% CO2）中孵育 30 分钟至 1 小时，待 Matrix Gel 完全凝胶化。