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总 RNA 的提取（Trizol 法提取）

在收集到生物材料之后，最好能即刻进行 RNA 制备工作。若需暂时储存，

则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备 RNA 时，将储

存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，

以避免 RNase 的作用。

1. 提取组织 RNA 时，每 50～100mg 组织用 1ml Trizol 试剂对组织进行裂解；

提取细胞 RNA 时，先离心沉淀细胞，每 5-10 ╳10

6

个细胞加 1ml Trizol 后，反

复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；版权文档，请勿用做商业用途

2. 将上述组织或细胞的 Trizol 裂解液转入 EP 管中,在室温 15~30C 下放置 5 分

钟；

3. 在上述 EP 管中，按照每 1ml TRIZOL 加 0.2ml 氯仿的量加入氯仿，盖上 EP

管盖子，在手中用力震荡 15 秒，在室温下（15℃～30℃）放置 2～3 分钟后，

12000g（2℃～8℃）离心 15 分钟；版权文档，请勿用做商业用途

4. 取上层水相置于新 EP 管中,按照每 1ml TRIZOL 加 0.5ml 异丙醇的量加入异

丙醇，在室温下（15℃～30℃）放置 10 分钟,12000g（2℃～8℃）离心 10 分

钟；版权文档，请勿用做商业用途

5. 弃上清，按照每 1ml TRIZOL 加 1ml 75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g

（2℃～8℃）离心 5 分钟，弃上清；版权文档，请勿用做商业用途

6. 让沉淀的 RNA 在室温下自然干燥；

7. 用 Rnase-free water 溶解 RNA 沉淀。

PCR

实验室常用 DNA 聚合酶有三种：TaKaRa Taq

TM

，TaKaRa E

X

Taq

TM

和

Pyrobest

TM

DNA Polymerase。TaKaRa Taq

TM

是一般的 DNA 聚合酶，保真性较差，

但价钱便宜，一般用于基因表达的检测等。TaKaRa E

X

Taq

TM

是具有 Proof reading

活性的耐热性 DNA 聚合酶，具有一定的保真性，而且其扩增得到的 PCR 产物

3’端附有一个“A”碱基，如果希望直接将产物克隆到 T-vector 可以用此酶。

Pyrobest

TM

DNA Polymerase 也是具有 Proof reading 活性的耐热性 DNA 聚合酶，

其特点是保真性极高，扩增得到的 PCR 产物为平滑末端。如果进行基因的扩增

请使用此酶。版权文档，请勿用做商业用途

1. 按下列组成在 PCR 反应管中调制反应液：

TaKaRa Taq

TM

或 TaKaRa E

X

Taq

TM

的配方

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