Inmunofluorescencia directa (IFD)

Notas del editor

• #4 La Inmunofluorescencia es una técnica inmunohistoquímica que demuestra la presencia de complejos antígenos-anticuerpos depositados en los tejidos. Dicha técnica se basa en una reacción antígeno-anticuerpo, la cual se hace visible por la incorporación de un colorante fluorescente (rodamina o fluoresceína) que no modifica la especificidad del anticuerpo. De ella existen dos tipos; la IFD y la IFI. La principal diferencia entre estas técnicas es que la primera requiere de anticuerpos contra cada microorganismo y la segunda utiliza un único marcador (universal).(Toledo et al, 1993, p. 134)
• #5 Suelen utilizarse para identificar un microorganismo en una muestra clínica. Durante este procedimiento la muestra que contiene el antígeno por identificar se fija sobre un portaobjetos. A continuación se agregan anticuerpos marcados con fluoresceína y tras una breve incubación del portaobjetos se lo lava para eliminar todo el anticuerpo no unido al antígeno. Luego se lo examina con un microscopio de fluorescencia a fin de determinar la fluorescencia amarillo verdosa (Tortora, Funke y Cas, 2007, p. 542) La solución de anticuerpos fluorescentes se aplica sobre el corte, se incuba y se lava. Los anticuerpos unidos se revelan después con un microscopio provisto de lámpara de luz ultravioleta. La luz ultravioleta se dirige hacia el corte a través del objetivo, con lo que el campo queda oscuro y las áreas con anticuerpos presentan fluorescencia verde. El patrón de fluorescencia es característico para cada antígeno hístico (Universidad del Rosario, 2006, p.20).
• #6 Inmunofluorescencia Directa (IFD): detecta virus Influenza A o B mediante anticuerpos fluorescentes, con sensibilidad de 80% 1.- Poner la cabeza del paciente en un ángulo de + 70 grados. 2.- Introducir tórula de dacron en ambas fosas nasales, deslizándola por la mucosa del piso de la fosa nasal hasta tocar la pared posterior de la faringe; frotar la faringe haciendo girar la tórula para obtener una buena cantidad de células epiteliales. Nota: No introducir la tórula hacia arriba siguiendo la forma de la nariz; la tórula debe dirigirse hacia atrás siguiendo el piso de la nariz. 3.- Retirar la tórula y ponerla en el tubo de medio de transporte (MTA, MTV) o culturette según el examen y laboratorio de destino. Nota: Para IFD o cultivo: Si la tórula de dacrón no cabe entera en el frasco de MTA o MTV, debe cortarse o quebrarse con la ayuda de una tijera. Para Test Pack: Al usar la minitip culturette no olvide quebrar la ampolla que trae el sobre. 4. 4.- Mantenga muestras a 4 grados C hasta que sean recogidas por el servicio de transporte (http://virus.uc.cl/virus_respiratorios/influenza/diagnostico.htm)
• #7 Inmunofluorescencia Directa (IFD): detecta virus Influenza A o B mediante anticuerpos fluorescentes, con sensibilidad de 80% 1.- Poner la cabeza del paciente en un ángulo de + 70 grados. 2.- Introducir tórula de dacron en ambas fosas nasales, deslizándola por la mucosa del piso de la fosa nasal hasta tocar la pared posterior de la faringe; frotar la faringe haciendo girar la tórula para obtener una buena cantidad de células epiteliales. Nota: No introducir la tórula hacia arriba siguiendo la forma de la nariz; la tórula debe dirigirse hacia atrás siguiendo el piso de la nariz. 3.- Retirar la tórula y ponerla en el tubo de medio de transporte (MTA, MTV) o culturette según el examen y laboratorio de destino. Nota: Para IFD o cultivo: Si la tórula de dacrón no cabe entera en el frasco de MTA o MTV, debe cortarse o quebrarse con la ayuda de una tijera. Para Test Pack: Al usar la minitip culturette no olvide quebrar la ampolla que trae el sobre. 4. 4.- Mantenga muestras a 4 grados C hasta que sean recogidas por el servicio de transporte (http://virus.uc.cl/virus_respiratorios/influenza/diagnostico.htm)
• #10 Inmunofluorescencia Directa (IFD): detecta virus Influenza A o B mediante anticuerpos fluorescentes, con sensibilidad de 80% 1.- Poner la cabeza del paciente en un ángulo de + 70 grados. 2.- Introducir tórula de dacron en ambas fosas nasales, deslizándola por la mucosa del piso de la fosa nasal hasta tocar la pared posterior de la faringe; frotar la faringe haciendo girar la tórula para obtener una buena cantidad de células epiteliales. Nota: No introducir la tórula hacia arriba siguiendo la forma de la nariz; la tórula debe dirigirse hacia atrás siguiendo el piso de la nariz. 3.- Retirar la tórula y ponerla en el tubo de medio de transporte (MTA, MTV) o culturette según el examen y laboratorio de destino. Nota: Para IFD o cultivo: Si la tórula de dacrón no cabe entera en el frasco de MTA o MTV, debe cortarse o quebrarse con la ayuda de una tijera. Para Test Pack: Al usar la minitip culturette no olvide quebrar la ampolla que trae el sobre. 4. 4.- Mantenga muestras a 4 grados C hasta que sean recogidas por el servicio de transporte (http://virus.uc.cl/virus_respiratorios/influenza/diagnostico.htm)
• #11 La IFD, gracias a la aparición de los anticuerpos monoclonales, fue el primer tipo de procedimiento en desarrollarse. Existen actualmente en el comercio un gran número de marcas de anticuerpos mono-clonales disponibles para el diagnóstico de este patógeno. Algunos de ellos, como MicroTrak® (EUA), Kallestad® (EUA), PathoDx® (EUA), reconocen la proteína principal de la membrana externa de la clamidia, la que constituye más del 50% de las proteínas de la membrana. (https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0716-10182001000400006)
• #13 Al igual que la mayoría de las técnicas de fluorescencia, un problema muy significativo con la inmunofluorescencia es el fotoblanqueo. Es decir, la perdida de la actividad fluorescente causada por la exposición a la luz. Esta perdida de actividad puede ser controlada reduciendo la intensidad o el tiempo de exposición a la liz incremetando la concentración de fluoroforo, o empleando fluoroforos mas robustos que sena menos propoensos al fotoblanqueo.