MPB | 扬州大学王梦芝组-​​反刍动物瘤胃原虫的分离培养与形态学分析

反刍动物瘤胃原虫的分离培养与形态学分析

Separation and Morphological Analysis of Protozoa from Rumen Contents

高健，甄永康，王梦芝*，王洪荣

动物科学与技术学院，扬州大学，扬州，江苏

*通讯作者邮箱: [email protected]

引用格式：高健, 甄永康, 王梦芝, 王洪荣. (2021). 反刍动物瘤胃原虫的分离培养与形态学分析. // 微生物组实验手册. Bio-101: e2003581. DOI: 10.21769/BioProtoc.2003581.

How to cite: Yunyun Gao, Kai Peng, Defeng Bai, et al. 2024. The Microbiome Protocols eBook initiative: Building a bridge to microbiome research. iMeta 3: e182. https://doi.org/10.1002/imt2.182

摘要：反刍动物瘤胃中含有大量原虫，其在保持瘤胃微生态环境稳定、促进饲料分解与发酵等方面起着重要的作用。瘤胃原虫主要有内毛属、双毛属、等毛属、头毛属和前毛属，其胞核的数量与形态是分类的重要标志。本文介绍了在厌氧工作站中，先通过显微镜进行原虫细胞分选，再培养瘤胃原虫，最后在显微镜下对瘤胃原虫进行形态学分析。

关键词：瘤胃原虫，微生物分离，形态学分析

材料与试剂

1.16 × 150-mm培养管 (配备橡胶塞)

2.毛细吸管

3.大口径吸管

4.载玻片

5.纱布

6.CO₂气体，纯度为99.999%

7.磷酸氢二钾，K₂HPO₄

8.磷酸二氢钾，KH₂PO₄

9.硫酸铵，(NH₄)₂SO₄

10.氯化钠，NaCl

11.硫酸镁，MgSO₄

12.二水合氯化钙，CaCl₂·2H₂O

13.半胱氨酸盐酸盐

14.碳酸钠，Na₂CO₃

15.刃天青

16.乙酸钠，CH₃COONa

17.碳酸氢钠，NaHCO₃

18.小麦粉

19.鸭茅粉

20.无氧稀释液溶液 (见溶液配方)

21.培养液M (见溶液配方)

22.培养液SP (见溶液配方)

23.底物悬液 (见溶液配方)

仪器设备

1.40目筛

2.解剖显微镜

3.恒温水浴锅

4.厌氧工作站

5.离心机

实验步骤

1.晨饲后，采用负压装置从装有永久瘘管的反刍动物瘤胃中采集瘤胃液，经双层纱布过滤后，放入到充CO₂并39°C预温保温瓶中带回实验室。

2.过滤的瘤胃液放入到厌氧工作站中，使用无氧稀释液依次进行十倍梯度稀释 (10^-2、10^-3或其他倍数，以每个计数格6~8只原虫为准)，稀释后的瘤胃液放置于厌氧工作站中39 °C保存