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Universidade Estácio deSá-CampusTeresópolis
Disciplina: MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA (ARA0023)
Aula prática: Preparo de Meio
de Cultura Comercial e Coleta
de Microrganismos
Meio de Cultura
O material nutriente preparado para o crescimento de
microrganismos
em laboratório é chamado de meio de cultura.
Algumas bactérias, fungos e leveduras:
▪ podem crescer bem em qualquer meio de
cultura;
▪ Outras requerem meios especiais,
▪ e outras ainda não podem crescer em
qualquer dos meios não vivos até agora
desenvolvidos.
Meio de Cultura
▪ Os microrganismos que são introduzidos em um meio de cultura para dar início
ao crescimento são chamados de inóculo.
▪ O inóculo pode crescer e se multiplicar no interior ou sobre um meio de cultura.
▪ Quando crescidos e meios são chamados de cultura.
Quais critérios um meio de cultura deve preencher?
1° conter os nutrientes adequados para o microrganismo específico que queremos
cultivar.
2° conter também uma quantidade de água suficiente,
3° pH apropriado e
4° um nível conveniente de oxigênio, ou talvez nenhum.
Meio de Cultura
▪ O meio deve ser estéril – isto é, inicialmente não deve conter microrganismos
vivos,
▪ dessa forma, a cultura conterá apenas os microrganismos (e sua descendência)
que foram introduzidos.
▪ Por fim, a cultura em crescimento deve ser incubada em temperatura
apropriada. Meio de
Cultura
Meio
Meio definido complexo
▪ Não se sabe a composição química exata
▪ Adição precisa de substâncias do meio de cultura.
orgânicas e inorgânicas;
• Caseína (ptn do leite);
▪ Ex.: • Extrato de levedura (células de levedura);
▪ Composição química exata.
• Extrato de carne, soja.
▪ Fontes altamente nutricionais.
▪ Real composição é desconhecida.
Meio de Cultura
▪ Ácido hidrolisado de caseína e extrato de carne
fornecem aminoácidos,
▪ nitrogênio,
▪ minerais,
▪ vitaminas,
▪ carbono
▪ e outros nutrientes que suportam o crescimento de
microrganismos.
Preparo de Meio de Cultura
Especificações Técnicas:
Composição g/L
Triptona 5,0
Glicose 1,0
Extrato de Levedura 2,5
Agar 15,0 Controle de Qualidade:
Microrganismos ATCC Crescimento
pH Final= 7,0 + 0,2 a 25°C Escherichia coli 25922 Bom
Staphylococcus aureus 25923 Bom
Bacillus subtilis 6633 Bom
Preparação:
▪ Suspender 23,5g de pó em 1 litro de água destilada.
Aquecer até ficar completamente dissolvido.
Preparo de Meio de Cultura 7
Roteiro prático
• OBJETIVOS DA ATIVIDADE:
→Ao final da atividade, o aluno deve ser capaz de:
▪ Aprender a fazer o meio de cultura;
▪ Compreender para que serve o meio de cultura;
Coleta de Microrganismos
▪ A maioria dos materiais infecciosos, como pus, escarro e urina, contém diversos tipos
de bactérias; da mesma forma que amostras de solo, água ou alimento.
▪ Quando esses materiais são semeados na superfície de um meio sólido, as colônias
formam cópias exatas do organismo original.
▪ As estimativas são de que apenas cerca de 1% das bactérias nos ecossistemas
produzem colônias por métodos de cultura convencionais.
▪ As colônias microbianas frequentemente têm uma aparência distinta, o que
permite distinguir um microrganismo do outro.
Prática: Preparo de Meio de Cultura e Coleta de Microrganismos
• OBJETIVOS DA ATIVIDADE:
▪ Fazer o meio de cultura comercial;
▪ Aprender o procedimento correto de plaqueamento do meio;
▪ Coletar microrganismos presentes na mucosa ou em objetos
Prática: Preparo de Meio de Cultura e Coleta de Microrganismos
MATERIAIS:
• 1 Placas de Petri;
• Meio de cultura Mueller hinton;
• Água destilada;
• Becker;
• Espátula,
• Balança;
• Lamparina;
• Fósforo;
• Swab ;
• Placa aquecedora;
Metodologia de Preparo do Meio de Cultura
▪ Utilizar a balança para pesar a quantidade em gramas de meio para preparo de 100 mL
▪ (Utilizar o Becker para fazer a pesagem);
▪ Utilizar a proveta para medir 100 mL de água;
▪ Misturar o meio de cultura com a água no Becker e misturar com o auxílio de uma bastão de
vidro;
▪ Levar a mistura para placa aquecedora para fervura (3 vezes).
▪ Após a fervura, ligar a lamparina para proporcionar um ambiente estéril ao redor da chama:
38g 1000mL 38g 1000mL
Xg 100mL Xg 250mL
3,8 gramas de meio de cultura 9,5gramas de meio de cultura
Metodologia de Preparo do Meio de Cultura
1. Abrir as placas de Petri próximo a chama e plaquear o meio de cultura.
2. Após o plaqueamento, fechar as placas e aguardar a solidificação do meio (5 – 10 min.).
3. Após a solidificação realizar a coleta dos microrganismos com o auxílio do Swab no local
escolhido (bancada, celular, mucosa, sapato, maçaneta, corrimão, banco, unhas).
4. Identificar as placas (nome de um do grupo, data, número da turma de vocês, local de
origem dos microrganismos ) e guarda-las na estufa.
5. Após uma semana será realizada a observação das placas.
ATENÇÃO COMO USAR A AUTOCLAVE:
• Prepare o material a ser autoclavado.
• Muitos materiais – principalmente novos – devem ser embalados em
papel craft (cor marrom) antes do procedimento, como por
exemplo, placas de Petri, caixas de pipetas, tubos, elermeyer,
becker, alças, tubos e entre outros.
• IMPORTANTE: Não esquecer a fita indicativa da autoclavagem
ATENÇÃO COMO USAR A AUTOCLAVE:
• Lembre-se que antes de usar o equipamento devemos abastecer
o reservatório com água destilada até a marca.
• IMPORTANTE: NÃO PASSAR DO LIMITE DEMARCADO (pois a água se
acumula no interior da autoclave após o término do processo)
• Deixe espaço para a circulação do vapor.
• Utilize apenas sacos próprios para autoclavagem.
• Sempre confira o nível de água, pois se estiver abaixo da
resistência a autoclave pode ser danificada.
ATENÇÃO COMO USAR A AUTOCLAVE:
Então...
• Coloque os materiais na autoclave;
• Feche e sele a tampa;
• Ligue-a no máximo e quando começar a sair vapor, feche a válvula;
• Espere a temperatura atingir 121°C;
• Uma vez nessa temperatura, mude para o médio e deixe 15 minutos;
• Após o período, desligue a autoclave e abra a válvula para o vapor sair;
• Só abra a tampa depois que o manômetro estiver no zero;
• Retire o material com luvas resistentes ao calor.
• Esse é um procedimento básico e dependendo do seu objetivo ele pode
variar
Vídeos assistidos em aula:
• https://www.youtube.com/watch?v=FY1-7eIijaY;
• https://www.youtube.com/watch?v=lgpb-vZ54Zw;
• https://www.youtube.com/watch?v=2NeY8BjxSEQ.
