Apresentação EUs Helena Raquel atualizada.pptx

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  IMUNOEXPRESSÃO DE PTENE DE LGR5 NO CÂNCER DE ESTÔMAGO, METÁSTASES LINFONODAIS E MUCOSA GÁSTRICA HISTOLÓGICA NORMAL. Parte 1: correlações clínico-patológicas. Helena Raquel Nogueira de Oliveira Lívia Maria Rodrigues de Sousa Marcelo Victor Ribeiro Sales Paulo Roberto Carvalho de Almeida
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  INTRODUÇÃO ● Câncer gástricoé a quinta neoplasia mais incidente no mundo. ● No Ceará apresenta segunda maior prevalência entre homens e sexta entre mulheres. ● A relevância do entendimento da sua classificação e patogênese. ● Importância dos estudos moleculares carcinogenéticos dada a alta prevalência. ● O câncer é produto da interação de diversos fatores, como a reprogramação do metabolismo, evasão do sistema imune, instabilidade genômica e inflamação promotora de tumor (HANAHAN; WEINBERG, 2011). INCA, 2020
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  INTRODUÇÃO ● A viade sinalização PI3K-AKT-Mtor regula uma variedade de processos celulares, estando alterada, frequentemente, no mecanismo de várias neoplasias malignas. ● Essa via encontra-se envolvida em efeitos promotores de proliferação, resistência à apoptose, angiogênese e mobilidade celular. ● O PTEN é um gene supressor tumoral que antagoniza a via supracitada. ● O LGR5 é um receptor 5 acoplado à proteína G. Células gástricas que produzem LGR5 podem ser células iniciadoras de câncer (Li, et al., 2016).
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  OBJETIVO ● Avaliar apossível relação da expressão de PTEN e LGR5 em câncer gástrico com variáveis clínico-patológicas.
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  METODOLOGIA ● Foram utilizadas91 amostras de peças de gastrectomias do DPML-UFC. ● Foi avaliada a expressão dos 2 biomarcadores citados em amostras de carcinoma gástrico dos histotipos intestinal e difuso (Lauren) e sua relação com idade, sexo, invasão angiolinfática e estadiamento tumoral entre outras variáveis. Quinones; Portanova; Yabar, 2011
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  METODOLOGIA • Estudo transversale observacional • Critérios de inclusão: Peças de gastrectomia realizadas no HUWC (câncer, mucosa gástrica histologicamente normal, linfonodos). Período: Agosto 2016 a julho de 2020 133 casos, selecionados 91 casos • Critérios de exclusão: Material insuficiente Material mal preservado Material com extensas áreas de necrose Linfoma, tumores originários da JEG, tipo misto de Lauren
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  METODOLOGIA TISSUE MICROARRAY • QuickRay® • Blocos pré-moldados UNITMA® • 60 lacunas - 2mm • Tecidos de tireoide, próstata e mama para orientar o TMA • 292 amostras
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  METODOLOGIA
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  METODOLOGIA IMUNOHISTOQUÍMICA PTEN ● Microtomia –4 micrômetros ● Estufa 65ºC – 15 minutos ● BenchMark ULTRA da empresa ROCHE® ● UltraView Universal DAB Detection Kit ● Incubação ac primário – 36min ● Anticorpo monoclonal de coelho PTEN(138G6) - CellSignaling Technology® - diluição 1:50
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  METODOLOGIA IMUNOHISTOQUÍMICA LGR5 ● Microtomia –4 micrômetros ● Estufa 60ºC – 60 minutos ● Recuperação antigênica – Dako PT Link® tampão ph6 Envision Flex Target Retrieval Solution 97ºC - 20min ● Bloqueio da peroxidase endógena com o reagente Envision TM Flex Peroxidase – Blocking Reagent (Dako®) - 10 minutos. ● Incubação ac primário – 60min
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  METODOLOGIA IMUNOHISTOQUÍMICA LGR5 ● Anticorpo monoclonalde camundongo anti-LGR5 (Clone ID:OTI2A2 – [TA503316] Origene®) - diluição 1:100 ● Incubação com polímero HRP (Dako®Envision Flex/HRP detection Reagent) - 30 minutos ● Revelação com cromógeno (Envision Flex DAB + Chromogen-DM827 – Dako®) - 5 minutos ● Contracoloração hematoxilina de Harris – 1 minuto ● Desidratação, diafanização e montagem das lâminas
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  METODOLOGIA IMUNOMARCAÇÃO • Intensidade: (0)negativo, (1) leve, (2) moderado e (3) intenso • Frequência: (0) nenhuma célula corada, (1) até 10%, (2) 11-50%, (3) 51-80% e 4) > 80% • Escore = Intensidade x frequência • Escores de baixa expressão (<6) e escores de alta expressão (≥6) • Curva ROC: pontos de corte 1 (LGR5) e 6 (PTEN)
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  RESULTADOS IMUNOEXPRESSÃO DO PTEN •Em relação à marcação do PTEN e o tamanho do tumor, esse gene supressor apresentou uma baixa expressão de 61% e uma alta expressão de 31% nos tumores menores de 5 centímetros e 82% de baixa expressão e 18% de alta expressão nos maiores de 5 centímetros, p= 0,0254 (p<0,05).
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  RESULTADOS IMUNOEXPRESSÃO DO LGR5 •o LGR5 mostrou uma relação com a invasão angiolinfática, quando esse parâmetro era ausente 33% das amostras eram positivas e 67% das amostras negativas, quando presente 12% das amostras eram positivas e 88% das amostras negativas, p= 0,0114 (p<0,05).
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  RESULTADOS PTEN E VARIÁVEISCLÍNICAS E PATOLÓGICAS
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  RESULTADOS LGR5 E VARIÁVEISCLÍNICAS E PATOLÓGICAS
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  CONCLUSÃO ● Conclui-se quea expressão do PTEN se mostrou baixa em relação ao tamanho tumoral e o LGR5 foi menos expresso com a presença de invasão angiolinfática.
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  OBRIGADA!