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有一个基因的gff和cds文件怎么得到全序列的fasta文件

时间: 2025-06-27 17:07:17 浏览: 44
### 使用 GFF 和 CDS 文件生成完整 FASTA 序列 为了从基因的 GFF (General Feature Format) 文件和对应的 CDS (Coding DNA Sequence) 文件生成完整的 FASTA 序列文件,可以采用多种方法实现这一目标。以下是详细的说明: #### 方法一:利用 Bioinformatics 工具 一些生物信息学工具可以直接解析 GFF 文件并提取相应的序列。例如 `bedtools` 或者 `gffread` 是常用的命令行工具。 - **gffread**: 这是一个来自 Cufflinks 套件中的工具,能够读取 GFF/GTF 文件并将其中定义的转录本转换成 FASTA 格式的序列。 ```bash gffread -g genome.fa -w transcripts.fa input.gff3 ``` 上述命令会基于参考基因组 (`genome.fa`) 提取出由 GFF 文件指定区域所覆盖的核酸序列,并将其保存到 `transcripts.fa` 中[^1]。 #### 方法二:编写自定义脚本 如果偏好编程方式,则可以通过 Python 结合 Biopython 库来完成此操作。下面提供了一个简单的例子展示如何依据给定的 GFF 数据结构以及关联的 CDS 片段构建最终的蛋白质或者 mRNA 的 FASTA 表达形式。 ```python from Bio import SeqIO import re def extract_cds_sequences(gff_file, fasta_genome): cds_dict = {} with open(fasta_genome) as f: genome_seq_records = {rec.id : rec.seq for rec in SeqIO.parse(f, "fasta")} pattern = r'ID=([^;]+);' with open(gff_file) as handle: for line in handle: if not line.startswith('#'): fields = line.strip().split("\t") feature_type = fields[2] chrom = fields[0] start = int(fields[3]) - 1 # Convert to zero-based coordinates. end = int(fields[4]) strand = fields[6] attributes = fields[-1] match_id = re.search(pattern, attributes) if match_id and feature_type == 'CDS': gene_id = match_id.group(1) subseq = genome_seq_records[chrom][start:end].reverse_complement() if strand == '-' else genome_seq_records[chrom][start:end] if gene_id in cds_dict.keys(): cds_dict[gene_id] += str(subseq).upper() else: cds_dict[gene_id] = str(subseq).upper() return cds_dict cds_sequences = extract_cds_sequences('input.gff3', 'reference_genome.fasta') for key,value in cds_sequences.items(): print(f">{key}\n{value}") ``` 上述代码片段展示了如何遍历 GFF 文件中的每一行记录,当遇到类型为 “CDS” 的条目时,按照其位置参数截取相应染色体上的子串作为该部分编码区的实际碱基组成;最后累积得到整个开放阅读框内的核苷酸顺序[^2]。 #### 注意事项 - 需要确保输入数据的一致性和准确性,比如确认 GFF 文件里的坐标系是否匹配实际使用的参考基因组版本。 - 如果涉及多外显子拼接的情况,在处理过程中需特别注意保持正确的方向性(正链 vs 负链),并且可能还需要考虑相位(phase)等因素的影响。
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#!/bin/sh #SBATCH -p Cnode2 #SBATCH -o anchorwave_%j.log #SBATCH -e anchorwave_%j.err #SBATCH -N 1 #SBATCH -n 16 #SBATCH --mem=128G #SBATCH --time=48:00:00 set -euo pipefail # 1. 初始化设置 WORKDIR="/public/home/2019187/liu_test/06_anchorwave_analysis" mkdir -p ${WORKDIR}/{logs,intermediate_files,results} REF_FASTA="/public/home/2019187/liu_test/04_chr1:153,455,209-153,522,148_mummer/Zm-Mo17-chr1_sub.fa" TARGET_FASTA="/public/home/2019187/liu_test/04_chr1:153,455,209-153,522,148_mummer/Zm-B73-chr1_sub.fa" # 2. 创建有效的GFF文件(真实基因结构) echo "[$(date '+%Y-%m-%d %H:%M:%S')] 创建有效GFF文件..." | tee ${WORKDIR}/progress.log # 获取序列长度 REF_LEN=$(grep -v '^>' ${REF_FASTA} | tr -d '\n' | wc -c) TARGET_LEN=$(grep -v '^>' ${TARGET_FASTA} | tr -d '\n' | wc -c) # 创建真实结构的GFF文件(模拟3个基因为AnchorWave提供足够信息) cat > ${WORKDIR}/intermediate_files/realistic.gff << EOF ##gff-version 3 chr1 AnchorWave gene 1 $((REF_LEN/3)) . + . ID=gene1 chr1 AnchorWave mRNA 1 $((REF_LEN/3)) . + . ID=mRNA1;Parent=gene1 chr1 AnchorWave exon 1 $((REF_LEN/6)) . + . ID=exon1;Parent=mRNA1 chr1 AnchorWave exon $((REF_LEN/6+1)) $((REF_LEN/3)) . + . ID=exon2;Parent=mRNA1 chr1 AnchorWave CDS $((REF_LEN/12)) $((REF_LEN/6)) . + 0 ID=cds1;Parent=mRNA1 chr1 AnchorWave CDS $((REF_LEN/6+1)) $((REF_LEN/4)) . + 0 ID=cds2;Parent=mRNA1 chr1 AnchorWave gene $((REF_LEN/3+1)) $((2*REF_LEN/3)) . - . ID=gene2 chr1 AnchorWave mRNA $((REF_LEN/3+1)) $((2*REF_LEN/3)) . - . ID=mRNA2;Parent=gene2 chr1 AnchorWave gene $((2*REF_LEN/3+1)) ${REF_LEN} . + . ID=gene3 chr1 AnchorWave mRNA $((2*REF_LEN/3+1)) ${REF_LEN} . + . ID=mRNA3;Parent=gene3 EOF # 3. 提取保守序列(使用真实CDS区域) echo "[$(date '+%Y-%m-%d %H:%M:%S')] 提取保守序列..." | tee -a ${WORKDIR}/progress.log anchorwave gff2seq \ -i ${WORKDIR}/intermediate_files/realistic.gff \ -r ${REF_FASTA} \ -o ${WORKDIR}/intermediate_files/conserved.fa \ -m 20 \ -x \ > ${WORKDIR}/logs/gff2seq.log 2>&1 # 检查是否成功提取序列 if [ ! -s "${WORKDIR}/intermediate_files/conserved.fa" ]; then echo "[ERROR] 保守序列提取失败!" | tee -a ${WORKDIR}/progress.log exit 1 fi # 4. 序列比对(提高比对敏感性) echo "[$(date '+%Y-%m-%d %H:%M:%S')] 比对保守序列..." | tee -a ${WORKDIR}/progress.log # 比对到目标基因组 minimap2 -ax splice:hq -t 16 --secondary=no ${TARGET_FASTA} \ ${WORKDIR}/intermediate_files/conserved.fa \ > ${WORKDIR}/intermediate_files/conserved.sam 2> ${WORKDIR}/logs/minimap2_target.log # 比对到参考基因组(提高锚点准确性) minimap2 -ax splice:hq -t 16 --secondary=no ${REF_FASTA} \ ${WORKDIR}/intermediate_files/conserved.fa \ > ${WORKDIR}/intermediate_files/conserved_ref.sam 2> ${WORKDIR}/logs/minimap2_ref.log # 5. 运行AnchorWave(调整关键参数) echo "[$(date '+%Y-%m-%d %H:%M:%S')] 启动AnchorWave比对..." | tee -a ${WORKDIR}/progress.log anchorwave proali \ -i ${WORKDIR}/intermediate_files/realistic.gff \ -r ${REF_FASTA} \ -a ${WORKDIR}/intermediate_files/conserved.sam \ -as ${WORKDIR}/intermediate_files/conserved.fa \ -ar ${WORKDIR}/intermediate_files/conserved_ref.sam \ -s ${TARGET_FASTA} \ -n ${WORKDIR}/intermediate_files/output.anchors \ -o ${WORKDIR}/intermediate_files/output.maf \ -f ${WORKDIR}/intermediate_files/fragmentation.maf \ -t 16 \ -fa3 5000 \ -w 10000 \ -R 1 \ -Q 1 \ -B -4 \ -O1 -4 \ -E1 -2 \ -O2 -80 \ -E2 -1 \ -m 20 \ -mi 0.6 \ # 降低最小相似度要求 -mi2 0.5 \ # 降低新锚点相似度要求 -e 2 \ # 允许基因拷贝数变异 -y 0.5 \ # 调整锚点丢弃阈值 -d 3 \ -O -0.03 \ -E -0.01 \ -I 1 \ # 降低最小链得分 -D 50 \ # 增加最大gap大小 -ns \ # 禁用新锚点搜索(避免无锚点错误) > ${WORKDIR}/logs/anchorwave.log 2>&1 # 检查MAF文件是否生成 if [ ! -s "${WORKDIR}/intermediate_files/output.maf" ]; then echo "[ERROR] AnchorWave未能生成MAF文件!" | tee -a ${WORKDIR}/progress.log echo "请检查日志文件:${WORKDIR}/logs/anchorwave.log" | tee -a ${WORKDIR}/progress.log exit 1 fi # 6. 转换MAF到VCF echo "[$(date '+%Y-%m-%d %H:%M:%S')] 转换MAF到VCF..." | tee -a ${WORKDIR}/progress.log anchorwave maf2vcf \ -i ${WORKDIR}/intermediate_files/output.maf \ -r ${REF_FASTA} \ -o ${WORKDIR}/results/raw_snps.vcf.gz \ --min-identity 0.7 \ # 降低最小一致性要求 --sv-boundary 100 \ # 减小SV边界区域 --compress \ > ${WORKDIR}/logs/maf2vcf.log 2>&1 # 7. SNP过滤(调整过滤标准) echo "[$(date '+%Y-%m-%d %H:%M:%S')] 过滤SNP..." | tee -a ${WORKDIR}/progress.log bcftools view ${WORKDIR}/results/raw_snps.vcf.gz | \ bcftools filter \ -e 'QUAL<15 || DP<3 || AF<0.15 || MQ<15' \ # 放宽过滤标准 -Oz -o ${WORKDIR}/results/filtered_snps.vcf.gz \ --threads 16 \ --set-GTs . \ --include 'TYPE="snp"' \ > ${WORKDIR}/logs/bcftools.log 2>&1 bcftools index -t ${WORKDIR}/results/filtered_snps.vcf.gz # 8. 生成结果报告 echo "[$(date '+%Y-%m-%d %H:%M:%S')] 生成最终报告..." | tee -a ${WORKDIR}/progress.log { echo "===== AnchorWave分析报告 =====" echo "运行参数:" echo "参考基因组: ${REF_FASTA} (长度: ${REF_LEN} bp)" echo "目标基因组: ${TARGET_FASTA} (长度: ${TARGET_LEN} bp)" echo "GFF文件: ${WORKDIR}/intermediate_files/realistic.gff" echo -e "\n关键步骤统计:" echo "保守序列数: $(grep -c '^>' ${WORKDIR}/intermediate_files/conserved.fa)" echo "有效SAM比对数: $(samtools view -c -F 2308 ${WORKDIR}/intermediate_files/conserved.sam)" echo -e "\nSNP统计:" RAW_SNPS=$(bcftools view -H ${WORKDIR}/results/raw_snps.vcf.gz 2>/dev/null | wc -l || echo 0) FILTERED_SNPS=$(bcftools view -H ${WORKDIR}/results/filtered_snps.vcf.gz 2>/dev/null | wc -l || echo 0) echo "总SNP数: ${RAW_SNPS}" echo "过滤后SNP数: ${FILTERED_SNPS}" if [ ${RAW_SNPS} -gt 0 ]; then echo "过滤率: $(awk -v r=${RAW_SNPS} -v f=${FILTERED_SNPS} 'BEGIN{printf "%.1f%%", (1-f/r)*100}')" fi if [ ${FILTERED_SNPS} -gt 0 ]; then echo -e "\nSNP类型分布:" bcftools view -H ${WORKDIR}/results/filtered_snps.vcf.gz 2>/dev/null | \ awk '{print $4">"$5}' | sort | uniq -c | sort -nr | \ awk '{printf "%s: %d (%.1f%%)\n", $2, $1, $1/'${FILTERED_SNPS}'*100}' fi } > ${WORKDIR}/results/final_report.txt # 9. 清理临时文件 find ${WORKDIR}/intermediate_files -type f \( -name "*.sam" -o -name "*.bam" \) -delete echo "[$(date '+%Y-%m-%d %H:%M:%S')] 分析完成!结果保存在 ${WORKDIR}/results" | tee -a ${WORKDIR}/progress.log echo "请查看报告文件: ${WORKDIR}/results/final_report.txt" | tee -a ${WORKDIR}/progress.log这符合anchorwave的使用规范嘛

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